| 人Ⅱ型CD74基因胞外端片段在昆虫细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 师文娟,邵丁丁,钟翔,王恒. 人Ⅱ型CD74基因胞外端片段在昆虫细胞中的表达[J]. 基础医学与临床, 2010, 30(6): 598-602 |
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| 作者姓名： | 师文娟 邵丁丁 钟翔 王恒 |
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| 作者单位： | 中国医学科学院,基础医学研究所,北京协和医学院,基础学院,病原生物学系,北京,100005 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，国家重点基础研究发展规划(973计划) |
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| 摘 要： | 目的 建立昆虫杆状病毒表达系统表达人II型 CD74胞外端片段的技术平台。方法 运用分子克隆技术，分别将CD 74胞外端全长(73-232 aa)和与MIF结合的核心区(109-192 aa)片段置于表达载体pFastBacDual的PPH启动子下，重组质粒转入含有Bacmid的大肠杆菌DH10Bac后与病毒基因组重组，提取重组病毒杆粒基因组转染Sf-21细胞系。用RT-PCR检测目的基因mRNA，SDS-PAGE和Western-blot分析重组蛋白的表达。结果 CD74胞外端全长(73-232 aa)可实现在昆虫细胞中的表达，目的蛋白可被His标签抗体和CD74抗体识别；在细胞感染72h，病毒接种滴度MOI为8时，目的蛋白可实现最大表达量。CD74与MIF结合的核心区109-192 aa片段在mRNA可实现转录的情况下未实现目的蛋白表达。结论 成功建立人II型 CD74胞外端全长在昆虫细胞Sf-21中的表达平台，并获得了目的蛋白表达的优化条件。
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| 关 键 词： | CD74 杆状病毒 昆虫细胞 蛋白表达 |
| 收稿时间： | 2010-04-01 |
| 修稿时间： | 2010-04-06 |
Expression of hCD74 truncated fragment in insect baculovirus vector system |
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| SHI Wen-juan,SHAO Ding-ding,ZHONG Xiang,WANG Heng. Expression of hCD74 truncated fragment in insect baculovirus vector system[J]. Basic Medical Sciences and Clinics, 2010, 30(6): 598-602 |
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| Authors: | SHI Wen-juan SHAO Ding-ding ZHONG Xiang WANG Heng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | CD74 |
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