| NT4-p53(N15)-Ant融合基因重组腺病毒的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 宋丽萍,李跃萍,邱曙东,杨广笑,王全颖. NT4-p53(N15)-Ant融合基因重组腺病毒的构建与鉴定[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志, 2006, 13(3): 214-218 |
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| 作者姓名： | 宋丽萍 李跃萍 邱曙东 杨广笑 王全颖 |
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| 作者单位： | 西安交通大学第一附属医院放疗科, 西安 710061;西安交通大学医学院人体解剖与组织胚胎学系, 西安 710061;西安交通大学医学院人体解剖与组织胚胎学系, 西安 710061;西安华广生物工程公司, 西安 710025;西安华广生物工程公司, 西安 710025 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（30471942）,陕西省科技攻关项目（2004k11G3） |
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| 摘 要： | 目的：〖HT5"SS〗构建编码融合基因NT4p53(N15)Ant的重组腺病毒表达载体,为进一步基因治疗的实验研究奠定基础。〖HT5W〗方法〖HT5"SS〗：利用PCR体系延伸互为模板的引物,通过T载体克隆法获得p53(N15)Ant基因克隆,酶切后连入pBV220/NT4质粒,再将融合基因NT4p53(N15)Ant亚克隆至腺病毒的穿梭质粒内,与辅助质粒PJM17共同转染HEK293细胞,通过同源重组获得重组腺病毒Ad.NT4p53(N15)Ant,收集病毒上清,大量扩增并测定其滴度,用RTPCR检测目的基因在293细胞的表达情况。MTT比色法观察重组病毒对HepG2细胞存活率的影响。〖HT5W〗结果：〖HT5"SS〗克隆出p53(N15)Ant基因,经酶切及测序证实结果正确;得到高滴度的（1×1011pfu/ml）重组腺病毒表达载体;反转录聚合酶链反应证实感染Ad.NT4p53(N15)Ant的293细胞中有目的基因的表达。Ad.NT4p53(N15)Ant对HepG2细胞有强烈的杀伤作用,与Ad.GFP比较,NT4 p53(N15)Ant重组腺病毒处理组HepG2细胞的存活率明显降低。〖HT5W〗结论：〖HT5"SS〗通过分子克隆体外重组技术成功制备了NT4p53(N15)Ant复制缺陷型重组腺病毒,为下一步的肿瘤基因治疗奠定了基础。
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| 关 键 词： | NT4p53(N15)Ant 重组腺病毒 肿瘤 基因治疗 |
| 文章编号： | 1007-385X(2006)03-0214-05 |
| 收稿时间： | 2006-02-27 |
| 修稿时间： | 2006-05-21 |
Construction and identification of recombinant adenovirus vector harboring fusion gene NT4-p53(N15)-Ant |
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| SONG Li-ping,LI Yue ping,QIU Shu-dong,YANG Guang-xiao and WANG Quan-ying. Construction and identification of recombinant adenovirus vector harboring fusion gene NT4-p53(N15)-Ant[J]. Chinses Journal of Cancer Biotherapy, 2006, 13(3): 214-218 |
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| Authors: | SONG Li-ping LI Yue ping QIU Shu-dong YANG Guang-xiao WANG Quan-ying |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | NT4-p53(N15)-Ant recombinant adenovirus carcinoma gene therapy |
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