| 慢病毒介导的Ⅰ型胶原shRNA在大鼠系膜细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 单毅,周春华.慢病毒介导的Ⅰ型胶原shRNA在大鼠系膜细胞中的表达[J].解放军医学杂志,2010,35(2). |
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| 作者姓名： | 单毅 周春华 |
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| 作者单位： | 1. 海军总医院重症医学科,北京,100048
2. 海军总医院肾内科,北京,100048 |
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| 基金项目： | 北京市自然科学基金(7063094) |
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| 摘 要： | 目的探讨慢病毒介导的Ⅰ型胶原(ColⅠ)短发夹RNA(shRNA)在大鼠系膜细胞的表达情况。方法利用三质粒合成法将表达质粒合成慢病毒表达载体,分别用感染增强剂(对照组)、空慢病毒载体(pSC-GFP组)和慢病毒表达载体(pSC-GFP/ColⅠ组)感染大鼠系膜细胞。采用流式细胞仪检测各组大鼠系膜细胞的转染效率,并采用RT-PCR和Western blotting方法检测各组ColⅠmRNA及ColⅠ蛋白表达情况。结果pSC-GFP和pSC-GFP/ColⅠ均能高效感染大鼠系膜细胞,其中pSC-GFP感染效率为72.42%,pSC-GFP/ColⅠ感染效率高达75.42%。RT-PCR检测提示pSC-GFP/ColⅠ组细胞ColⅠmRNA表达量较对照组、pSC-GFP组显著降低(P<0.05),其抑制效率为32.64%±0.12%,而后两组ColⅠmRNA表达差异无统计学意义。Western blotting检测显示,与对照组、pSC-GFP组比较,pSC-GFP/ColⅠ组蛋白表达明显降低(P<0.05),而对照组与pSC-GFP组之间ColⅠ蛋白表达差异无统计学意义。结论慢病毒载体能稳定、高效地将ColⅠs...
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| 关 键 词： | 胶原Ⅰ型 RNA干扰 慢病毒感染 |
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