二硫键稳定的抗肝癌人源化scFv—hTNFα突变体融合在大肠杆菌中表达

目的 提高抗肝癌体靶向人肿瘤坏死因子（scFv-hTNFα）的稳定性和杀伤活性，并探讨该新型靶向细胞因子在大肠杆菌中的可溶性表达。方法 以引物PCR法和重叠延伸PCR法，对人源化抗肝癌hscFv25及hTNFα基因进行定点突变，构建重组表达载体pGEX-hFvT，并以IPTG在大肠杆菌中诱导表达。用免疫组化染色和MTT比色法，分别检测重组蛋白折抗体和hTNFα突变体的双重活性。结果 重组基因在大肠杆菌中获得高效可溶性表达。表达产物具有抗体和hTNFα突变体的双重活性，重组蛋白的稳定性得到大幅度提高，抗体活性于4℃放置3个月活性无明显下降，抗肿瘤活性较天然hTNFα高4倍。结论 重组基因在大肠杆菌中获得了高效功能性表达；重组蛋白稳定性及抗肿瘤性得到大幅度提高，为进一步的临床应用研究奠定了基础。