| 靶向乙型肝炎病毒X蛋白小干扰RNA对稳定表达X基因的正常人肝细胞株线粒体功能的影响 |
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| 引用本文： | 黄嵘峰,林纳,陈红英,陈治新,王小众. 靶向乙型肝炎病毒X蛋白小干扰RNA对稳定表达X基因的正常人肝细胞株线粒体功能的影响[J]. 中华传染病杂志, 2009, 27(8). DOI: 10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2009.08.002 |
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| 作者姓名： | 黄嵘峰 林纳 陈红英 陈治新 王小众 |
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| 作者单位： | 福建医科大学附属协和医院消化内科,福州,350001 |
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| 摘 要： | 目的 构建并鉴定靶向HBV X蛋白(HBx)小干扰RNA(siRNA)重组表达质粒,观察其对稳定表达HBx基因的正常人肝细胞株HL-7702/HBx线粒体功能的影响.方法 设计合成两条针对全长HBx基因具有短发夹结构的siRNA序列,克隆至载体psiRNA-Hh1GFPzeo中,构建重组表达质粒pX1和pX2,并以不针对任何序列的重组质粒pScr作为对照.通过脂质体介导转染人HL-7702/HBx肝细胞株,RT-PCR及Western印迹检测其对HBx的阻抑效应.流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)和线粒体膜电位(△ m)水平的变化.采用方差分析对实验结果进行统计分析.结果酶切鉴定和测序结果证实pX1和pX2构建成功.pScr、pX1、pX2分别转染入HL-7702/HBx细胞48 h后,空白对照组HBx mRNA和蛋白表达水平分别为0.65±0.12和0.62±0.09,pX1组分别为0.33±0.10和0.19±0.08,明显低于空白对照组(t=4.73,P<0.05;t=7.53,P<0.05),pX2组分别为0.48±0.10和0.37±0.11,亦明显低于空白对照组(t=2.39,P<0.05;t=4.43,P<0.05),但pX1组抑制效果强于pX2组(t=2.28,P<0.05).RNA干扰后细胞内ROD水平为5.00±0.38,△ m水平为33.86±0.50;空白对照组ROS为72.10±0.55,△ m为3.57±0.26(t=276.22,P<0.05;t=107.15,P<0.05).结论 靶向HBx的siRNA能特异性抑制HBx在HL-7702/HBx细胞中的表达,并降低细胞内ROS水平,提高△ m水平,减轻细胞内氧化应激反应.
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| 关 键 词： | 肝炎病毒,乙型 病毒蛋白质类 RNA,小分子干扰 氧 膜电位 线粒体,肝 |
Effects of small interfering RNA targeting hepatitis B virus X protein on mitochondrial function in healthy liver cell line steadily expressed X gene |
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| HUANG Rong-feng,LIN Na,CHEN Hong-ying,CHEN Zhi-xin,WANG Xiao-zhong. Effects of small interfering RNA targeting hepatitis B virus X protein on mitochondrial function in healthy liver cell line steadily expressed X gene[J]. Chinese Journal of Infectious Diseases, 2009, 27(8). DOI: 10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2009.08.002 |
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| Authors: | HUANG Rong-feng LIN Na CHEN Hong-ying CHEN Zhi-xin WANG Xiao-zhong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hepatitis B virus Viral proteins RNA,small interfering Oxygen Membranepotentials Mitochondria,liver |
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