核心岩藻糖基转移酶siRNA抑制肾小管上皮细胞转化生长因子β-Smad2/3通路活化

目的 探讨α-1，6核心岩藻糖基转移酶（FUT8）小分子干扰RNA（siRNA）对肾小管上皮细胞转化生长因子（TGF）β-Smad2/3信号通路的影响。 方法 HK-2细胞共分为6组：正常组、阴性对照组、TGF-β1组、TGF-β1加FUT8干扰组、TGF-β1加阴性对照组、FUT8干扰组。利用外源性TGF-β1激活HK-2细胞TGF-β-Smad2/3信号通路。应用siRNA技术沉默FUT8。用免疫荧光方法测定细胞表面核心岩藻糖链表达；用免疫沉淀、凝集素免疫印迹以及免疫双染的方法测定FUT8基因沉默后TGF-βⅡ型受体（TGF-βRⅡ）、TGF-βⅠ型受体（ALK-5）的核心岩藻糖基化变化，并检测Smad2/3蛋白表达和磷酸化（p）-Smad2/3蛋白表达及其核转位的变化。 结果 与正常组及阴性对照组相比，加入5 μg/L的TGF-β1孵育HK-2细胞48 h，能显著上调 TGF-βRⅡ和ALK-5蛋白表达水平（P < 0.05），导致p-Smad2/3表达水平明显升高（P < 0.05），并促使其发生核转位。HK-2细胞表面存在核心岩藻糖链表达。与正常组及阴性对照组相比，TGF-β1孵育后，TGF-βRⅡ与ALK-5两种受体的核心岩藻糖链均显著升高（P < 0.05），FUT8 siRNA能显著抑制TGF-βRⅡ与ALK-5核心岩藻糖链表达（P < 0.05），从而抑制p-Smad2/3表达升高（P < 0.05）及其核转位，但不影响TGF-βRⅡ和 ALK-5的蛋白表达（P > 0.05）。 结论 在肾小管上皮细胞中，TGF-βRⅡ和ALK-5蛋白翻译后的核心岩藻糖基化修饰是它们发挥生物学功能所需要的，阻止TGF-βRⅡ和ALK-5的核心岩藻糖基化，能抑制TGF-β-Smad2/3信号转导通路的活化。