| 人血管内皮生长因子(VEGF165)在大肠杆菌中的表达及鉴定 |
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| 作者姓名： | 单志新 余细勇 林秋雄 刘媛 杨敏 符永恒 谭虹虹 林曙光 |
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| 作者单位： | 广东省心血管病研究所分子药理室,广东,广州,510080;广东省人民医院医学研究中心,广东,广州,510080 |
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| 基金项目： | 广东省自然科学基金，广东省科技厅科技计划，广东省卫生厅科研项目，广东省人民医院科研项目 |
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| 摘 要： | [目的]克隆人VEGF165基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达、纯化重组VEGF165(rVEGF165)蛋白.[方法]用PCR技术,从人心脏cDNA文库中扩增VEGF165cDNA,并定向克隆入原核表达载体pET-28a中.用IPTG诱导VEGF165在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.用HisTrap亲合层析柱纯化重组rVEGF165,Western-blot鉴定.根据人VEGF165的促血管内皮细胞增殖的特性,用MTT法检测重组VEGF165的生物学活性.[结果]从人心脏cDNA文库中扩增出VEGF165cDNA片段.克隆的VEGF165cDNA长576bp,编码191个氨基酸残基,序列与文献报道一致.SDS-PAGE电泳显示,经IPTG诱导,高效表达出25ku的rVEGF165,主要存在于包涵体中,约占菌体总蛋白的20%.MTT检测显示,复性后的rVEGF165能呈剂量依赖性地促进脐静脉血管内皮细胞增殖.[结论]克隆、测定了人VEGF165基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出rVEGF165.
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| 关 键 词： | 血管内皮生长因子 克隆,分子 基因表达 |
| 文章编号： | 1672-3554(2004)3S-0023-03 |
| 修稿时间： | 2003-11-25 |
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