| 摘 要： | 目的观察丹参酮ⅡA(Tanshinone ⅡA,TⅡA)对人非小细胞肺癌A549细胞增殖的影响,探讨TⅡA诱导A549细胞自噬与细胞周期阻滞的关系。方法采用CCK8法检测TⅡA(0.5、1、2、4、8μmol·L~(-1))对A549细胞增殖的抑制作用;利用流式细胞术检测TⅡA(1、2、4μmol·L~(-1))对A549细胞周期分布的影响;采用Western Blot法检测TⅡA(1、2、4μmol·L~(-1))对A549细胞周期相关蛋白Cyclin D1和自噬相关蛋白p62、LC3B表达的影响;分别采用自噬激动剂雷帕霉素(Rapamycin,RAPA;0.25μmol·L~(-1))+TⅡA(2μmol·L~(-1))或自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA,5 mmol·L~(-1))+TⅡA(2μmol·L~(-1))培养处理A549细胞,然后采用Western Blot法检测细胞Cyclin D1、p62、LC3B蛋白的表达,并通过流式细胞术检测细胞周期分布。结果与对照组比较,TⅡA不同浓度组对A549细胞均具有明显的增殖抑制作用(P 0.05,P 0.01),且呈时间-剂量依赖关系;药物作用12、24 h后,TⅡA的IC50值分别为7.82、2.04μmol·L~(-1)。与对照组比较,TⅡA能降低A549细胞Cyclin D1的表达量(P 0.01),使细胞周期阻滞于G0/G1期(P 0.05,P 0.01),且呈剂量依赖性;TⅡA能够升高A549细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(P 0.05,P 0.01),降低p62表达(P 0.01),诱导细胞发生自噬。与TⅡA组比较,3-MA+TⅡA组A549细胞中的LC3-Ⅱ/LC3-I比值明显降低(P 0.01),p62及Cyclin D1表达水平明显上调(P 0.01),停滞于G0/G1期的细胞比例明显减少(P 0.05)。结论 TⅡA可能通过上调人非小细胞肺癌A549细胞自噬诱导细胞周期阻滞,从而抑制细胞增殖,发挥抗肿瘤作用。
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