CRISPR系统相关蛋白的纯化与活性分析

目的对CRISPR相关蛋白Cas3、Cas6及Cas9进行表达纯化,并测定其活性。方法在体外构建带有目的基因的质粒,导入大肠杆菌表达系统,通过大肠杆菌的过表达,裂解并提取蛋白,利用His标签,可将目的蛋白纯化出来;通过3种Cas蛋白对不同核酸的切割,分别设计3种核酸底物,再通过聚丙烯酰胺凝胶电泳,最终确定Cas蛋白的活性。结果成功表达并纯化得到Cas3、Cas6及Cas93种蛋白,并根据其蛋白特性,与相应的核酸底物进行孵育,在电泳后通过凝胶成像,可观察到3种蛋白均具有活性。结论表达纯化的Cas3、Cas6及Cas9具有生物学功能,为其功能机制研究奠定了基础。