用尿嘧啶-DNA-糖基化酶控制聚合酶链反应的产物污染 |
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作者姓名: | 陆建荣 章幼奕 华文久 倪丽萍 |
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作者单位: | 南通市传染病防治院 |
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摘 要: | 聚合酶链反应(PCR)灵敏度极高,痕量的PCR产物能污染新的PCR体系(称为产物污染)导致假阳性结果,我们通过在所有的PCR扩增中掺入dUTP使PCR产物含“dU”,在以后的PCR扩增前用尿嘧啶-DNA糖基化酶(Uracil-DNA-Glycolase,UDG)处理,然后加热去除UDG活性防止了产物污染。UDG切割磷酸糖骨架上的尿嘧啶,可阴止DNA聚合酶对它的复制,而对普通DNA(即含”dT”)无影响。因为UDG不与dUTP反应,而且在PCR扩增前加热变性失活,使含尿嘧啶的污染物的污染得到很好控制。
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关 键 词: | 尿嘧啶-DNA-糖基化酶;污染;聚合酶链式反应;肝炎 |
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