铅致大鼠心肌细胞损伤中蛋白激酶C对缝隙连接蛋白43表达的调控作用

目的 研究醋酸铅染毒大鼠心肌细胞株（H9c2）后蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）、缝隙连接蛋白43（connexin 43，Cx43）及其磷酸化蛋白的表达变化，探讨心肌损伤过程中PKC对Cx43的调控作用。方法 （1）将对数生长期H9c2随机分组，以醋酸铅0、5、10、20 μmol/L梯度浓度处理细胞12 h。（2）将对数生长期H9c2细胞随机分为对照组、醋酸铅组、醋酸铅＋佛波酯（phorbol 12-myristate 13-acetate，PMA）组和PMA组。PMA预处理后的醋酸铅+PMA组、醋酸铅组细胞均给予10 μmol/L醋酸铅染毒12 h，PMA组不予染毒。（3）检测各组H9c2细胞培养上清乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）活性；采用蛋白质印迹法（Western blot）检测各组H9c2细胞内Cx43、PKC蛋白相对表达含量及s368位点的Cx43磷酸化水平。结果 10、20 μmol/L醋酸铅染毒的H9c2细胞存活率较对照组明显降低（P<0.05）；10、20 μmol/L醋酸铅组H9c2细胞培养液LDH活性较对照组显著升高（P<0.05）；5、10、20 μmol/L醋酸铅组Cx43、p-Cx43s368、PKC蛋白相对表达含量与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05），且呈浓度依赖性降低；20 μmol/L醋酸铅组p-Cx43/Cx43显著低于对照组（P<0.05）。与对照组相比，醋酸铅组、醋酸铅+PMA组H9c2细胞培养液LDH活性显著升高（P<0.05），醋酸铅+PMA组细胞培养液LDH活性显著低于醋酸铅组（P<0.05）。与对照组相比，醋酸铅组、醋酸铅+PMA组细胞内Cx43蛋白相对表达含量降低，差异均有统计学意义（P<0.05）；醋酸铅+PMA组Cx43蛋白相对表达含量显著高于醋酸铅组（P<0.01）。结论 铅致心肌细胞损伤机制可能与PKC、Cx43及其磷酸化蛋白表达降低有关，PKC信号通路对Cx43表达具有调控作用。

Regulatory effect of protein kinase C on connexin 43 expression in lead-induced cardiomyocyte injury in rats