| 抗bFGF人源性抗体的瞬时表达、纯化及鉴定 |
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| 引用本文： | 陶俊,李丹,邓宁,王宏,龚义平,向军俭.抗bFGF人源性抗体的瞬时表达、纯化及鉴定[J].中国免疫学杂志,2010,26(10). |
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| 作者姓名： | 陶俊 李丹 邓宁 王宏 龚义平 向军俭 |
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| 作者单位： | 暨南大学生命科学技术学院抗体工程中心,广州,510632 |
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| 基金项目： | 国家科技计划"863"专题课题 |
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| 摘 要： | 目的:将一株人源性中和性抗bFGF单链抗体基因转入真核表达载体,进行真核瞬时表达,通过细胞试验进一步验证其中和活性。方法:将1AscFv抗体基因克隆到真核表达载体pIgG中(编码全长人源性IgG1类抗体),T4连接酶连接后,转化大肠杆菌DH5α,挑取4个克隆,经测序其中有一株含有正确的scFv序列,命名为pIgG-1A2,将pIgG-1A2转染真核细胞HEK293T进行瞬时表达,表达产物经蛋白G纯化后,SDS-PAGE检测纯化抗体的纯度;ELISA和Western blot检测抗体的特异性;MTT法检测纯化抗体对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)和人神经胶质瘤细胞株U87MG增殖的影响。结果:经酶切鉴定和测序发现pIgG-1A2含有正确的抗体轻重链基因,经293T细胞瞬时表达,表达产物经蛋白G亲和层析柱纯化后经SDS-PAGE鉴定,获得纯度为95%的电泳纯抗体,产量可以达到每升细胞培养上清10mg,交叉反应显示表达的抗体特异性针对bFGF,体外实验证实1A2能够抑制bFGF诱导的人脐静脉血管内皮细胞的增殖,同时还能抑制神经胶质瘤细胞株U87MG的增殖。结论:通过真核细胞成功地表达了抗bFGF人源性抗体,纯化后获得了高纯度的抗体,对HUVEC和神经胶质瘤细胞株U87MG具有抑制作用,为抗bFGF人源性抗体抗肿瘤研究奠定基础。
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| 关 键 词： | 人源性抗体 瞬时表达 中和活性 |
Expression,purification and characterization of a humanized antibody to bFGF by HEK293T cell |
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| TAO Jun,LI Dan,DENG Ning,WANG Hong,GONG Yi-Ping,XIANG Jun-Jian.Expression,purification and characterization of a humanized antibody to bFGF by HEK293T cell[J].Chinese Journal of Immunology,2010,26(10). |
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| Authors: | TAO Jun LI Dan DENG Ning WANG Hong GONG Yi-Ping XIANG Jun-Jian |
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| Institution: | TAO Jun,LI Dan,DENG Ning,WANG Hong,GONG Yi-Ping,XIANG Jun-Jian.Lab of Molecular Immunology and Antibody Engineering,Life Science and Technological College,Jinan University,Guangzhou 510632,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | bFGF |
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