| 人类微小RNA-1246慢病毒抑制载体的构建及对宫颈鳞癌细胞增殖和侵袭的影响 |
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| 引用本文： | 赖月华,姚德生,杜萍,卢艳. 人类微小RNA-1246慢病毒抑制载体的构建及对宫颈鳞癌细胞增殖和侵袭的影响[J]. 广西医学, 2016, 0(8): 1053-1057. DOI: 10.11675/j.issn.0253-4304.2016.08.01 |
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| 作者姓名： | 赖月华 姚德生 杜萍 卢艳 |
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| 作者单位： | 广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科二病区,南宁市,530021 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(8146039),广西自然科学基金(2011GXNSFA018184 |
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| 摘 要： | 目的 构建并鉴定微小RNA(miRNA)-1246慢病毒抑制载体,并探讨miRNA-1246下调对宫颈癌细胞增殖及侵袭的影响.方法 针对miRNA-1246成熟体的反义核苷酸片段设计引物并合成目的基因miRNA-1246-down,应用基因重组技术将目的基因克隆到空载质粒GV280中,通过酶切、PCR、DNA测序验证重组慢病毒质粒(GV280-miRNA-1246-down)的构建是否成功,将GV280-miRNA-1246-down、Helper 1.0、Helper 2.0共转染293T细胞获得重组慢病毒,浓缩提纯病毒液并检测病毒滴度,再用重组病毒液感染宫颈鳞癌细胞SiHa,通过检测绿色荧光蛋白(GFP)验证GV280-miRNA-1246-down在SiHa细胞的表达情况,用嘌呤霉素筛选GV280-miRNA-1246-down稳转细胞株.将SiHa细胞分为空白组(NC组)、阴性病毒组(NC-LV组)、miRNA-1246下调组(miRNA-1246-down-LV组),用细胞计数的方法检测细胞的生长率,用Transwell检测细胞侵袭能力.结果 (1)对菌落进行PCR鉴定筛选构建正确的慢病毒载体,DNA测序证实插入的基因序列正确.(2)慢病毒将目的基因miRNA-1246-down成功导入SiHa细胞中,同时达到稳定表达,转染率达90％以上,在荧光显微镜下能直接观察到GFP.(3) miRNA-1246-down-LV组SiHa细胞增殖数低于其他两组(P＜0.05),细胞穿膜次数较其他两组减少(P＜0.05).结论 miRNA-1246慢病毒抑制载体构建成功,miRNA-1246稳定下调的SiHa细胞株建立成功.在SiHa细胞中miRNA-1246下调可抑制宫颈鳞癌SiHa细胞的增殖以及侵袭能力.
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| 关 键 词： | 宫颈癌 慢病毒 微小RNA 抑制载体 增殖 侵袭 |
Construction of human microRNA-1246 inhibitor lentiviral vector and its influence on proliferation and invasion of cervical squamous carcinoma cells |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cervical cancer Lentivirus MicroRNA Inhibiton vector Proliferation Invasion |
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