酵素-Ⅱ分离人神经干细胞球

目的：寻找一种有效分离神经干细胞球并获得大量单个神经干细胞的方法。方法：取20周胎龄人胚胎脑组织分离单细胞，应用DMEM／F12培养基培养形成神经干细胞球，取神经干细胞球，分别以2．50g／L、1．25g／L胰蛋白酶及0．6u／ml、1．2u／ml、1．8u／ml、2．4u／ml酵素-Ⅱ(DispaseⅡ)消化，观察消化过程及细胞形态，对消化后的单个细胞进行培养，观察细胞生长情况，并进行免疫细胞化学染色鉴定。结果：各浓度DispaseⅡ均能较完全地消化神经干细胞球，其中1．2u／ml、1．8u／ml DispaseⅡ消化后的细胞生长状况最佳。胰蛋白酶消化后细胞有较大的损伤，成活细胞少。消化后的细胞Nestin抗体染色结果( )，证实为神经干细胞。结论：一定浓度的DispaseⅡ消化神经干细胞球后，可获得大量成活单个神经干细胞。