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| 人Tum-5基因逆转录病毒载体及包装细胞株的构建 | |
| 作者姓名： | 盖晓东 罗宏 历春 冯凯 |
| 作者单位： | 北华大学基础医学院,吉林,吉林,132013 |
| 基金项目： | 吉林省卫生厅重点实验室科研课题 |
| 摘 要： | 目的 构建携带Tum-5基因的逆转录病毒载体并对其进行包装,获得稳定的产毒细胞系.方法 采用RT-PCR法从胎肾组织中扩增Tum-5基因片断,并将其定向克隆到逆转录病毒载体pLXSN中进行PCR、双酶切和测序鉴定.利用电穿孔方法 将获得的重组质粒转染PA317细胞,经G418 筛选抗性克隆,收集病毒上清后感染NIH3T3 细胞测定病毒滴度.结果 PCR、酶切证实Tum-5基因克隆至逆转录病毒载体pLXSN,Tum-5基因测序结果 和原始序列相同.重组逆转录病毒载体转染PA317 包装细胞,RT-PCR证实转染后的PA317细胞上清液中存在携带人Tum-5基因的病毒RNA,病毒滴度为2.05×104cfu/ml.结论 成功的构建了携带人Tum-5基因的逆转录病毒载体,获得了稳定的产毒细胞系. |
| 关 键 词： | Tum-5基因 基因治疗 抗血管生成 逆转录病毒载体 |
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