| 摘 要： | 目的获得乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)C2蛋白的HBV多肽。方法同源重组法构建含1.2倍HBVC2全基因组表达重组体;脂质体法转染HepG2和Huh-7细胞;荧光定量PCR法检测HBV DNA水平;双抗体夹心酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)法检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和E抗原(HBeAg)的水平;免疫荧光法检测核心抗原(HBcAg)水平和分布。电转染法转染人永生化B淋巴细胞系(B-lymphoblastoid cell line, BLCL), 液相色谱串联质谱(liquid chromatography-mass spectrography/mass spectrometry, LC-MS/MS)法分离鉴定HBV多肽, 生物信息学预测亲合力, 并检索已报道序列。结果成功构建了含3881 bp目的片段的HBVC2全基因组的重组体, 即pAAV/HBV1.2C2。HepG2和Huh-7细胞转染重组体后24、48和72 h, 培养上清液中HBV DNA、HBsAg和HBeAg均呈现较高...
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