| RITA体外选择性抑制BAP1缺失的皮肤黑色素瘤细胞的生长 |
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| 引用本文： | 石文惠,刘小莲,张贵明,叶林萱,周润华,李亦蕾,余乐.RITA体外选择性抑制BAP1缺失的皮肤黑色素瘤细胞的生长[J].南方医科大学学报,2023(5):710-717. |
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| 作者姓名： | 石文惠 刘小莲 张贵明 叶林萱 周润华 李亦蕾 余乐 |
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| 作者单位： | 1. 南方医科大学药学院药物设计与发现研究创新群体;2. 南方医科大学南方医院临床药学中心 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（81973357）；;眼科学国家重点实验室开放研究基金（2022KF06）；;广东省自然科学基金（2022A1515011824）； |
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| 摘 要： | 目的 构建抑癌基因BAP1敲除的皮肤黑色素瘤细胞模型，筛选对BAP1缺失的皮肤黑色素瘤细胞具有选择性抑制活性的小分子化合物。方法 选择表达野生型BAP1的皮肤黑色素瘤细胞利用CRISPR-Cas9系统敲除BAP1基因，获得与亲代细胞同基因型的BAP1敲除克隆，通过MTT法筛选化合物库中对BAP1敲除细胞具有选择性抑制活性的小分子化合物。通过挽救实验，明确BAP1敲除细胞对化合物的敏感性是否与BAP1蛋白缺失直接相关。流式细胞术检测化合物对细胞周期和凋亡的影响。Western blotting检测化合物对蛋白表达的影响。结果 化合物库中的p53激活剂RITA选择性抑制BAP1敲除细胞的细胞活力。过表达野生型BAP1能够逆转BAP1敲除细胞对RITA的敏感性，而过表达去泛素化酶失活的突变型BAP1(C91S)没有挽救作用。与BAP1野生型对照细胞相比，BAP1敲除细胞对RITA引起的细胞周期阻滞和凋亡更为敏感（P<0.0001）。BAP1敲除增加了细胞p53蛋白的基础水平，而RITA处理后进一步增加p53蛋白表达（P<0.0001）。结论 BAP1缺失导致皮肤黑色素瘤细胞对p5...
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| 关 键 词： | 皮肤黑色素瘤 BAP1 RITA p53 细胞周期 细胞凋亡 |
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