小鼠初级精母细胞GC-2中TUBB4B的表达及其对NF-κB和MAPK信号通路的调控 |
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作者姓名: | 刘桐佳 王万伦 张婷 刘爽 边艳超 张传领 肖瑞 |
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作者单位: | 1. 内蒙古医科大学内蒙古自治区分子病理学重点实验室;2. 内蒙古医科大学药学院 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(31760304);;教育部“春晖计划”项目;;内蒙古科技计划项目(2019GG154);;内蒙古自然基金项目(2020LH03016); |
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摘 要: | 目的 探究微管蛋白(TUBB4B)与胞浆羧肽酶(CCP1)在小鼠初级精母细胞(GC-2)中的互相作用关系,以及TUBB4B在调控GC-2发育中的作用。方法 使用慢病毒感染GC-2细胞分别构建TUBB4B基因敲减组(TUBB4B-KD组)和阴性对照组(NCKD组);TUBB4B基因过表达组(TUBB4B-OE组)与阴性对照组(NC-OE组),利用嘌呤霉素筛选稳定细胞株。采用RT-qPCR和Western blot分别在m RNA和蛋白水平上检测细胞模型是否构建成功,并进一步探究在GC-2细胞中TUBB4B与CCP1二者之间相互调控的表达关系。CCK8及流式细胞术检测TUBB4B沉默和过表达后对GC-2细胞增殖及周期的影响;Western blot及细胞免疫荧光实验找出TUBB4B沉默和过表达后发生表达改变的信号通路因子,并在细胞水平上进行标记验证。结果 GC-2中与NC-KD(NC-OE)组相比,TUBB4B沉默和过表达后,CCP1在mRNA和蛋白水平上的表达均发生一致的性改变(P<0.05);同样CCP1敲减和恢复表达后与NC组相比,TUBB4B的表达也随之发生一致的性改变(P&...
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关 键 词: | 雄性不育 胞浆羧肽酶 微管蛋白 初级精母细胞 NF-κB通路 MAPK通路 |
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