小分子化合物组合将人胚胎成纤维细胞体外编程为神经前体细胞 |
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引用本文: | 杨盼,王圆圆,高群伟,刘阳,王翼,郭俣,刘长青,刘高峰.小分子化合物组合将人胚胎成纤维细胞体外编程为神经前体细胞[J].南方医科大学学报,2023(3):360-367. |
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作者姓名: | 杨盼 王圆圆 高群伟 刘阳 王翼 郭俣 刘长青 刘高峰 |
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作者单位: | 1. 蚌埠医学院生命科学学院;2. 蚌埠医学院检验医学院 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(81771381);;安徽省高校自然科学基金重点项目(KJ2021ZD0085,KJ2021A0774,KJ2021A0784);;安徽省重点研究与开发计划项目(2022e07020030,2022e07020032);;国家级大学生创新创业训练项目资助(202110367043,202110367044,20210367058,202110367059)~~; |
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摘 要: | 目的 通过小分子化合物组合将人胚胎成纤维细胞(HEFs)重编程为化学诱导神经前体细胞(ciNPCs)。方法 HEFs重编程为ciNPCs涉及两个阶段,第1阶段是小分子组合诱导阶段,常氧条件下,将HEFs在含有小分子化合物组合VCR(VPA,CHIR99021,Repsox)的KSR培养基中培养15 d,HEFs形态发生变化,形成致密细胞集落。第2阶段是特异性诱导ciNPCs,将形成的细胞集落胰酶消化后,低粘附板中悬浮培养,可以形成ciNPCs神经球。采用CM-DiI染料标记P3代ciNPCs,并将其移植于6-OHDA法制作的帕金森大鼠模型右脑内侧前脑束(MFB)区,检测ciNPCs在PD大鼠脑内微环境中的存活、迁移以及分化状况。结果 VCR组合诱导10 d细胞开始出现明显的聚集趋势,15 d时,形成致密的细胞集落。单层培养1×105/孔中大约形成40个克隆,且AP染色呈阳性。将细胞集落消化后,低粘附板中悬浮培养培养2 d,可见大量神经球形成,即为第1代ciNPCs(P1代)。ciNPC高表达神经前体细胞(NPCs)特异性标记物(Nestin、Pax6和Sox2),经体外神经特异性诱导分...
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关 键 词: | 小分子化合物组合 细胞重编程 人胚胎成纤维细胞 神经前体细胞 |
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