| 摘 要： | 白细胞介素-1β转换酶(Interleukin-1β Converting Enzyme,ICE)是一种胞浆半胱氨酸蛋白酶。其作用是将无活性白细胞介素-1β原转换成白细胞介素-1β,诱导产生炎症反应。最近的研究发现,秀丽隐杆线虫的凋亡基因ced-3的蛋白产物与ICE的结构非常相似。由此推断,ICE充当着激活炎症反应和诱导细胞凋亡的双重功能,目前,ICE诱导细胞凋亡的机制尚不清楚,本研究就ICE基因表达载体的构建及其诱导肿瘤细胞的凋亡作一初步探讨。 我们用质粒ICE-pGEM-4经EcoR Ⅰ酶切,低溶点凝胶电泳回收1.3Kb的小片断,将其克隆入pLXSN质粒的EcoR Ⅰ位点内,转化TG-1细菌,制备质粒DNA,通过Hind Ⅲ酶切鉴定构建了正向插入的pLXSN-ICE重组体。靶细胞的基因导入采用3AO卵巢癌细胞悬液0.8ml(5×10~5个细胞)加入质粒DNA 10μg(pLXSN和pLXSN-ICE),混匀后用电穿孔仪将DNA导入细胞。随后加入DMEM/1640培养基,种入细胞培养板内,置37℃,5％CO_2,95％湿度条件下静置培养48小时,换入含G418的筛选培养基,二周后选择阳性克隆细胞进行扩增培养。免疫组织化学鉴定时,将扩增培养的细胞消化后涂于用多聚赖氨酸处四的玻片,吹干,再用多聚甲醛固定后,进行免疫组织化学鉴定。同时我们还用脂质体介导转导基因的方法进行了ICE直接诱导肿瘤细胞凋亡的观察,H
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