| Endostatin基因转染人脐带血CD34+ 造血干细胞的实验研究 |
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| 引用本文： | 胡洁,姜藻.Endostatin基因转染人脐带血CD34+ 造血干细胞的实验研究[J].现代医学,2005,33(3):158-161. |
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| 作者姓名： | 胡洁 姜藻 |
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| 作者单位： | 东南大学附属中大医院,肿瘤科,江苏,南京,210009 |
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| 摘 要： | 目的检测人endostatin(血管内皮抑制素)基因转染人脐带血CD34+造血干细胞后的表达和分泌情况.方法电穿孔法将Plncx/endo转染包装细胞PA317,G418筛选阳性克隆后用NIH3T3细胞测定病毒的滴度,RT-PCR法测定耐药的包装细胞中是否存在endostatin基因.取新鲜人脐带血40～80 ml,用Ficoll分离出单个核细胞,再用免疫磁珠(MiniMACS)进一步分离出CD34+造血干细胞,流式细胞仪(FCM)检测CD34+造血干细胞的浓度和纯度.将病毒上清与人脐带血CD34+造血干细胞共同培养72 h,应用RT-PCR及Western blot检测人endostatin的表达和分泌.结果 Plncx/endo质粒克隆扩增后,经酶切鉴定有endostatin基因存在.RT-PCR证实,转染人endostatin基因的PA317/endo、NIH3T3/endo细胞中存在人endostatin特异性片段,病毒滴度为1.3×105 cfu·ml-1.FCM检测,CD34+干细胞在脐血中的初始含量＜5%,经Mini-MACS分离纯化后纯度超过90%.从1×108的界面细胞平均可以分离获得(5～20)×105CD34+个干细胞.RT-PCR证实,脐带血CD34+/endo造血干细胞基因组中含有人550 bp endostatin特异性片段, Western blot分析显示人endostatin在转染细胞中获得稳定表达和分泌.结论逆转录病毒可以介导endostatin基因转导人脐带血CD34+造血干细胞并表达endostatin蛋白.
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| 关 键 词： | 逆转录病毒 基因 脐带血 造血干细胞 血管内皮抑制素 |
| 文章编号： | 1671-7562(2005)03-0158-04 |
| 修稿时间： | 2004年6月10日 |
Human endostatin gene transferred into human umbilical cord CD34+ hematopoietic stem cells |
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| HU Jie,JIANG Zao.Human endostatin gene transferred into human umbilical cord CD34+ hematopoietic stem cells[J].Modern Medical JOurnal,2005,33(3):158-161. |
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| Authors: | HU Jie JIANG Zao |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | retrovirus genes umbilical cord blood hematopoietic endostatin |
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