| 磷酸化标签方法检测异染色质蛋白1αDNA损伤后蛋白磷酸化状态 |
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| 引用本文： | 刘佳,周光前,尹献辉,李雪芹,王优雅,胡静仪,王子梅.磷酸化标签方法检测异染色质蛋白1αDNA损伤后蛋白磷酸化状态[J].华西医学,2012(6):828-831. |
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| 作者姓名： | 刘佳 周光前 尹献辉 李雪芹 王优雅 胡静仪 王子梅 |
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| 作者单位： | 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室;深圳大学医学院生物化学与分子生物学教研室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目(81070270);深圳市科技基金基础研究计划面上项目(JC201005280552A)~~ |
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| 摘 要： | 目的通过检测异染色质蛋白1α(HP1α)在DNA损伤后的磷酸化状况,介绍一种用磷酸化标签(phos-tag)试剂检测磷酸化蛋白质的新方法。方法取雄雌C57小鼠交配后孕13.5 d胚胎,分离并原代培养小鼠胚胎成纤维细胞。对照组及实验组(6个损伤时间点)各取2个100 mm培养皿的细胞进行实验,实验组细胞用喜树碱进行DNA损伤;对照组用等量的二甲基亚砜处理。用掺入phos-tag的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白并转印,将膜用抗HP1α的抗体孵育,用偶联辣根过氧化物酶的抗体做二抗,通过成像系统检测蛋白。结果实验组存在一条与HP1α有明显不同迁移率的磷酸化HP1α条带,与对照组相比DNA损伤后磷酸化HP1α含量一过性增多。结论 HP1α被DNA损伤诱导为磷酸化状态,提示其可能在DNA修复过程中扮演重要角色。Phos-tag蛋白质印迹法可采用普通抗体检测磷酸化的蛋白,是一种简便易行的检测未知磷酸化蛋白质的新方法。
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| 关 键 词： | 蛋白质磷酸化 磷酸化标签 异染色质蛋白1α DNA损伤 |
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