α2-巨球蛋白活性检测方法的建立与优化 |
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作者姓名: | 皇甫超济 吕茂民 马玉媛 王延琳 赵雄 章金刚 |
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作者单位: | 军事医学科学院野战输血研究所,北京,100850 |
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基金项目: | 国家863计划资助项目 |
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摘 要: | 目的:建立α2-巨球蛋白(α2-macroglobulin ,α2-M)活性检测方法,检测Cohn组分Ⅳ中α2-M的活性。方法α2-M可与胰蛋白酶相互作用形成“α2-M-胰蛋白酶复合物”,利用酶标仪检测出“α2-M-胰蛋白酶复合物”与小分子底物Na-苯甲酰-DL-精氨酸-对硝基酰胺盐酸盐( Na-benzoyl-DL-arginine 4-nitroanilide hydrochloride ,BAPNA)显色反应后的光密度值(410 nm),根据建立的血浆α2-M活性标准曲线,定量计算出Cohn组分Ⅳ浓缩液中α2-M的活性。结果通过对实验体系中几个关键实验条件进行优化,建立了血浆α2-M活性标准曲线,并计算出Cohn组分Ⅳ浓缩液中α2-M活性的平均值为1.578 PU/ml。结论以正常人混合血浆作为参考标准品,用发色底物法检测Cohn组分Ⅳ浓缩液中α2-M的活性,方法简便易行,为α2-M制备过程中活性测定提供了实验基础。
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关 键 词: | α2-巨球蛋白 Cohn组分Ⅳ 胰蛋白酶 胰蛋白酶抑制剂 BAPNA |
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