利用DNA洗牌技术一次性克隆多个基因

目的探讨DNA洗牌技术(DNA shuffling)对蛋白质组学和代谢组学等研究的意义。方法利用DNA洗牌技术一次性克隆多个基因片段到表达载体,并同时突变基因内部的2个氨基酸位点,PCR、酶切、测序检测构建表达载体的准确性。结果成功地一次性克隆了3个编码小RNA的串联短片段MSb1、MSb2、MSb3以及3个蛋白编码基因Fok I、MS2、Fok I,并一次性将PLRV-P0基因内部2个编码色氨酸(W)的密码子TGG突变为编码丙氨酸(A)的GCG密码子。结论 DNA洗牌技术可应用于基因组学、多基因功能鉴定、融合基因表达和一次性构建基因内部多个点突变的研究,具有精确、快速和高效的特点。