| 小鼠内皮抑制素真核质粒的构建表达及其体外活性 |
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| 引用本文： | 黎培员,林菊生,冯作化,贺宇飞,周鹤俊,田德安.小鼠内皮抑制素真核质粒的构建表达及其体外活性[J].华中科技大学学报(医学版),2007,36(2):179-182. |
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| 作者姓名： | 黎培员 林菊生 冯作化 贺宇飞 周鹤俊 田德安 |
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| 作者单位： | 1. 华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科,武汉,430030
2. 华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系,武汉,430030 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973计划) |
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| 摘 要： | 目的构建小鼠内皮抑制素(endostatin)真核表达质粒,进行分泌性表达,研究其体外生物学活性,以进一步用于肿瘤的基因治疗。方法人工合成小鼠Igκ轻链信号肽序列,RT-PCR获得小鼠内皮抑制素编码序列,一起克隆入真核表达载体pcDNA3.1中,对其进行酶切鉴定和序列分析。重组质粒经脂质体介导转染受体细胞BHK-21,ELISA检测细胞培养上清中内皮抑制素的含量。用此上清作用于经bFGF刺激的ECV304内皮细胞和HepG2肝癌细胞,MTT法检测细胞的增殖。结果经酶切鉴定及DNA测序分析,Igκ信号肽序列及内皮抑制素编码序列成功克隆到目的位点上,其转染细胞上清中可以检测到分泌出的内皮抑制素,含量为(65.5±10.9)ng/106细胞;并且可以抑制ECV304内皮细胞的增殖,抑制率约为29.2%,而对HepG2肝癌细胞增殖没有影响。结论成功构建了小鼠内皮抑制素真核质粒,其分泌性表达产物可以抑制内皮细胞的增殖,具有较好的生物学活性。
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| 关 键 词： | 内皮抑制素 Igκ信号肽 重组质粒 基因表达 内皮细胞 |
| 修稿时间： | 2006年6月23日 |
Construction and Expression of Mouse Endostatin Eukaryotic Plasmid and Its Bioactivity in vitro |
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