体外转录法制备地高辛标记cx43cRNA探针

原位杂交常用探针种类较多。检测组织细胞中mRNA，首选cRNA探针。与DNA探针不同，它是单链探针，杂交时无需变性，也没有互补链的干扰，敏感度比cDNA探针要高；与寡脱氧核酸探针比较，其敏感度也要高出许多；并且cRNA探针杂交形成RNA-RNA双链核酸比RNA-DNA和DNA-DNA双链核酸更稳定，从而允许多次洗涤，提高杂交信号，降低背景染色。但也有一些缺点，探针要求条件高，严防RNA酶污染；粘性强，与组织有较高的非特异性结合，需要多次漂洗。用地高辛标记cRNA探针，既克服了同位素探针的一些缺点，如受半衰期的限制，污物处理困难等．又避免了生物素标记探针时受内源性生物素的干扰。所以我们制备地高辛标记的cRNA探针原位杂交检测宫颈组织中的connexin43(CX43)mRNA。