| 新型重组IL-6 D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白复性及纯化 |
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| 引用本文： | 崔建武,奚永志,刘楠,梁飞,郭斯启,孙玉英. 新型重组IL-6 D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白复性及纯化[J]. 军事医学科学院院刊, 2004, 28(6): 523-526 |
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| 作者姓名： | 崔建武 奚永志 刘楠 梁飞 郭斯启 孙玉英 |
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| 作者单位： | 军事医学科学院附属医院免疫学研究室及国家生物医学分析中心免疫分析实验室,北京,100039 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(39500062,39870875) |
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| 摘 要： | 目的：对高效表达的重组IL-6 D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白进行包涵体的分离、变性与复性以及纯化。方法：对表达菌体进行超声破碎、洗涤、氧化还原法变性及复性，经离子交换层析。结果：工程菌HB101／pE01T的表达产物是以包涵体形式存在，菌体的破碎以高渗蔗糖溶液进行预处理后，再超声破碎效果最好；包涵体的洗涤则先用Triton-X-100洗2次，再用8mol／L尿素洗涤一次效果更优；最佳变性条件为在7mol／L盐酸胍中加入0．065mmol／L的DTT和0．2mol／L的盐酸精氨酸；最佳复性奈件为在10℃复性保持24h，蛋白浓度保持在30～80μg/ml，并需加入0．2mol／L盐酸精氨酸；利用谷胱甘肽的氧化还原法，当氧化型谷胱甘肽与还原型谷胱甘肽的浓度比在2：1时所获得的活性成分得率最高；利用强弱离子交换结合的方法能获得纯度为95％的目的蛋白，所得融合蛋白可与IL-6及PEA抗体相结合并能特异性地杀伤高表达IL-6R的人多发性骨髓瘤细胞。结论：本研究获得重组IL-6D24-PE40KDEL外毒素融合蛋白包涵体的分离、变性与复性条件和一条能获得大量高纯度该融合蛋白的纯化路线。
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| 关 键 词： | 重组外毒素融合蛋白 IL-6 D24-PE40KDEL 包涵体 变性 复性 蛋白纯化 |
| 文章编号： | 1000-5501(2004)06-0523-04 |
Renaturation and purification of IL-6 D24-PE40KDEL,a novel recombinant IL-6 Pseudomonas exotoxin fusion protein |
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| CUI Jian-Wu,XI Yong-Zhi,LIU Nan,LIANG Fei,GUO Si-Qi,SUN Yu-Ying. Renaturation and purification of IL-6 D24-PE40KDEL,a novel recombinant IL-6 Pseudomonas exotoxin fusion protein[J]. Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences, 2004, 28(6): 523-526 |
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| Authors: | CUI Jian-Wu XI Yong-Zhi LIU Nan LIANG Fei GUO Si-Qi SUN Yu-Ying |
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| Affiliation: | CUI Jian-Wu,XI Yong-Zhi*,LIU Nan,LIANG Fei,GUO Si-Qi,SUN Yu-Ying |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | recombinant exotoxin fusion protein IL-6 D24-PE40KDEL inclusion body denaturation renaturation protein purification |
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