| 人CCL20基因特异性shRNA重组慢病毒表达载体的构建及测序 |
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| 引用本文： | 董征学,彭代智,刘敬,周新,田易,李芳,严泉,林恒,王勇,周光前. 人CCL20基因特异性shRNA重组慢病毒表达载体的构建及测序[J]. 第三军医大学学报, 2006, 28(10): 1007-1009 |
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| 作者姓名： | 董征学 彭代智 刘敬 周新 田易 李芳 严泉 林恒 王勇 周光前 |
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| 作者单位： | 第三军医大学西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400038;贝尔法斯特女王大学癌症研究和细胞生物学中心,贝尔法斯特,英国,BT126BJ |
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| 基金项目： | 中国科学院资助项目，国家重点实验室基金 |
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| 摘 要： | 目的利用RNA干扰技术,以人CCL20基因为靶基因,设计CCL20基因特异性的小干扰RNA(siRNA),构建其短发夹RNA(shRNA)重组慢病毒表达载体,并进行测序鉴定.方法设计并合成人CCL20基因特异性的DNA寡核苷酸,连接到经Spe Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切线性化的pHSER-dsRNA-GFP-SIN质粒上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性菌落、扩增后提取质粒,进行DNA测序鉴定.结果将合成的两对人CCL20基因特异性DNA寡核苷酸序列退火后,分别克隆到线性化的pHSER-dsRNA-GFP-SIN载体质粒上.在氨苄青霉素培养基条件下,筛选出相应的阳性菌落,经DNA测序鉴定确实为所需序列.结论构建成功了2对人CCL20基因特异性shRNA重组慢病毒表达载体,可进一步用于干扰CCL20基因的mRNA转录,从而为制备CCL20基因表达抑制型的人角朊干细胞奠定基础.
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| 关 键 词： | RNA干扰 慢病毒表达载体 CCL20基因 |
| 文章编号： | 1000-5404（2006）10-1007-03 |
| 收稿时间： | 2006-03-17 |
| 修稿时间： | 2006-03-172006-04-10 |
Construction and sequencing of recombinant lentiviral plasmid affecting human CCL20 gene by RNA interfering |
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| DONG Zheng-xue,PENG Dai-zhi,LIU Jing,ZHOU Xin,TIAN Yi,LI Fang,YAN Quan,LIN Heng,WANG Yong,ZHOU Guang-qinn. Construction and sequencing of recombinant lentiviral plasmid affecting human CCL20 gene by RNA interfering[J]. Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae, 2006, 28(10): 1007-1009 |
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| Authors: | DONG Zheng-xue PENG Dai-zhi LIU Jing ZHOU Xin TIAN Yi LI Fang YAN Quan LIN Heng WANG Yong ZHOU Guang-qinn |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RNA interference lentiviral vector CCL20 |
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