| 带核定位信号的RARα与JTV1蛋白相互作用的验证实验 |
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| 引用本文： | 王翀,王东生,刘北忠,郝坡,刘畅,金丹婷,钟梁,王春光.带核定位信号的RARα与JTV1蛋白相互作用的验证实验[J].四川大学学报(医学版),2009,40(3). |
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| 作者姓名： | 王翀 王东生 刘北忠 郝坡 刘畅 金丹婷 钟梁 王春光 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学医学检验系,临床检验诊断学,教育部重点实验室,重庆,400016 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，国家中医药管理局科研课题，重庆医科大学课题 |
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| 摘 要： | 目的 通过实验验证带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)与JTV1蛋白之间的相互作用.方法 将表达NLS-RARα诱饵蛋白和JTV1靶蛋白的两种重组表达质粒共转化AH109酵母菌,通过一对一的酵母双杂交技术验证两者在活细胞内的相互作用;构建NLS-RARα及JTV1蛋白标签融合表达载体并共转染人胚肾293细胞,利用免疫共沉淀技术在体外验证二者之间的相互作用.结果 NLS-RARα诱饵蛋白和JTV1靶蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆;NLS-RARα及JTV1蛋白标签融合表达载体构建成功,共转染293细胞,抗HA多克隆抗体沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,用抗Myc单克隆抗体进行免疫印迹检测,可以检测到Myc-JTV1蛋白.结论 利用酵母双杂交和免疫共沉淀技术验证了NLS-RARα与JTV1间存在相互作用.
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| 关 键 词： | NLS-RARα 酵母双杂交 免疫共沉淀 蛋白质相互作用 |
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