大黄素联合survivin短发夹RNA对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响

目的探讨大黄素与survivin短发夹RNA(shRNA)联合应用对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响。 方法先用MTT法检测不同浓度(0、10、20、40、80 μmol/L)大黄素对人乳腺癌细胞株MCF-7生长抑制的影响,为后续联合用药实验筛选出适宜浓度(40 μmol/L)的大黄素。然后,将人乳腺癌细胞株MCF-7分为以下5组：空白对照组,细胞未做任何处理;阴性对照组,即NC shRNA组,加入空载质粒;大黄素处理组,用40 μmol/L大黄素处理细胞;survivin shRNA处理组,转染survivin shRNA质粒;联合处理组,用40 μmol/L大黄素与survivin shRNA联合处理细胞。利用MTT法、流式细胞术分别检测各组细胞的增殖(用吸光度值表示)和凋亡能力,用real-time PCR及蛋白质印迹法(Western blot法)分别检测细胞中survivin的mRNA和蛋白表达。由于细胞增殖活性检测结果显示空白对照组与阴性对照组差别不显著,故流式细胞术中不再设置阴性对照组。多组细胞间凋亡率及survivin的mRNA和蛋白表达量比较采用单因素方差分析,吸光度值比较采用重复测量的方差分析,组间两两比较采用LSD法。 结果MTT法显示,不同浓度(0、10、20、40、80 μmol/L)大黄素作用24、48、72 h后,各组细胞间吸光度值比较,差异有统计学意义(F＝1 873.565, P<0.001),并且,40 μmol/L大黄素对细胞增殖的抑制率为(53.6±1.2)%(>50.0%),因此选择该浓度进行后续实验。用不同方法处理细胞24、48、72 h后,空白对照组、阴性对照组、大黄素处理组、survivin shRNA处理组及联合处理组细胞的吸光度值比较,差异有统计学意义(F＝1 686.953, P<0.001),不同时间点间细胞吸光度值的差异也有统计学意义(F＝288.790, P<0.001),分组与时间点存在交互作用(F＝67.916, P<0.001)。流式细胞检测结果显示：空白对照组、大黄素处理组、survivin shRNA处理组和联合处理组细胞凋亡率分别为(0.57±0.10)%、(5.96±0.56)%、(9.00±0.73)%和(18.33±0.98)%,4组比较,差异有统计学意义(F＝114.848, P<0.001);大黄素处理组细胞凋亡率明显高于空白对照组(P<0.001);联合处理组细胞凋亡率明显高于其他各组(P均<0.001)。real-time PCR结果显示：空白对照组、阴性对照组、大黄素处理组、survivin shRNA处理组和联合处理组的mRNA表达量分别为1.000±0.000、0.968±0.033、0.774±0.049、0.483±0.026和0.364±0.012,5组比较,差异也有统计学意义(F＝284.199, P<0.001),进一步两两比较发现,联合处理组survivin mRNA表达量低于大黄素处理组(P<0.001)和survivin shRNA处理组(P＝0.001)。Western blot结果显示：空白对照组、阴性对照组、大黄素处理组、survivin shRNA处理组和联合处理组的survivin蛋白表达量分别为1.000±0.000、0.987±0.031、0.696±0.050、0.534±0.065和0.312±0.039,5组比较,差异有统计学意义(F＝142.311, P<0.001),进一步两两比较显示,联合处理组survivin蛋白表达量明显低于大黄素处理组和survivin shRNA处理组(P均<0.001)。 结论大黄素与survivin shRNA两者联合应用可明显抑制人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖。