不同方法提取的肿瘤抗原对小鼠CTL的体外激活效应的比较

目的 梯度高渗法，弱酸洗脱法，43℃加热处理等方法提取小鼠HepA22肝癌细胞抗原，用以致敏小鼠脾细胞，观察其对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的体外激活效应。方法①梯度高渗法，即2．7％NaCl，1．8％NaCl和蒸馏水3次低温高速离心，收集上清提取。②弱酸洗脱，以pH3．3的枸橼酸—磷酸盐缓冲液室温下处理HepA-22细胞5min，低速离心，收获上清。③43℃加热处理，将HepA-22细胞置于43℃．恒温水浴16h。④用提取的抗原致敏小鼠脾细胞，MTT法检测其体外CTL杀伤活性。结果 ①相同抗原浓度，不同条件或不同提取方法所获得的抗原对小鼠脾细胞CTL杀伤能力的激活作用不相同。②经过43℃处理后提取的抗原比未经加热处理提取的抗原作用大。③弱酸洗脱提取的膜抗原作用最明显。④去掉膜抗原后再提取的蛋白激活作用最小。⑤同种提取方法不同浓度抗原作用不同，随着浓度增高，CTL活性增强。结论 ①43℃加热处理可以诱导HepA-22细胞产生HSP-抗原肽复合物，增加其对小鼠CTL活性激活作用。②弱酸可以洗脱肿瘤细胞表面的I类抗原肽，该多肽致敏的小鼠脾细胞可以有效地诱导特异性抗肿瘤免疫功能。