| 含绿色荧光蛋白和PLCZ的逆转录病毒载体的构建及其在SHG44细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 李侠,章翔,顾建文,付洛安,孙强,刘先珍,王火亘. 含绿色荧光蛋白和PLCZ的逆转录病毒载体的构建及其在SHG44细胞中的表达[J]. 医学争鸣, 2001, 22(23): 2125-2129 |
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| 作者姓名： | 李侠 章翔 顾建文 付洛安 孙强 刘先珍 王火亘 |
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| 作者单位： | 1. 第四军医大学西京医院全军神经外科研究所,
2. 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室, |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，39970752， |
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| 摘 要： | 目的构建含有PLC-γ1分子Z区(PLCZ)和绿色荧光蛋白基因的双顺反子逆转录病毒载体,并将其导入SHG44胶质瘤细胞中,以探索PLC-γ1分子对胶质瘤细胞侵袭作用的影响. 方法 PCR法扩增PLCz基因,测序后克隆入pIRES-EGFP荧光蛋白表达载体中,酶切鉴定重组体. 将PLCz-IRES-EGFP片段克隆入逆转录病毒载体pLXSN的相应位点,构建含有PLCz和EGFP基因的逆转录病毒载体,脂质体介导下转染包装细胞PA317,G418筛选并检测病毒滴度后挑选细胞克隆. 病毒上清感染人脑胶质瘤SHG44细胞,G418筛选获得稳定转染细胞,PCR检测外源基因的整合,Northern blot检测外源基因的转录,Western blot和荧光显微镜分别检测PLCz分子和EGFP的表达. 结果 PCR扩增得到大小约650 bp的特异性条带,序列测定结果与发表序列一致. 构建得到含有PLCz和EGFP基因的双顺反子逆转录病毒载体,转染人脑胶质瘤细胞SHG44,得到稳定转染的细胞株SHG44-PIE. PCR扩增显示目的片段已整合入细胞基因组. Northern blot分析显示为单一的转录本. Western blot可见大小约50×103的特异性条带,荧光显微镜检测显示EGFP获得良好表达. 结论成功构建含有PLCz和绿色荧光蛋白基因的逆转录病毒载体,并获得稳定转染该载体的SHG44胶质瘤细胞株.
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| 关 键 词： | 绿色荧光蛋白 磷脂酶C 逆转录病毒载体 脑胶质瘤 |
| 文章编号： | 1000-2790(2001)23-2125-05 |
| 修稿时间： | 2001-07-11 |
Construction of retroviral vector containing green fluorescent protein and PLCZ and its expression in SHG44 glioma cells |
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| LI Xia ,ZHANG Xiang ,GU Jian Wen ,FU Luo An ,SUN Qiang ,LIU Xian Zhen ,WANG Xuan Institute of Neurosurgery of Chinese PLA,Xijing Hospital. Construction of retroviral vector containing green fluorescent protein and PLCZ and its expression in SHG44 glioma cells[J]. Negative, 2001, 22(23): 2125-2129 |
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| Authors: | LI Xia ZHANG Xiang GU Jian Wen FU Luo An SUN Qiang LIU Xian Zhen WANG Xuan Institute of Neurosurgery of Chinese PLA Xijing Hospital |
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| Affiliation: | LI Xia 1,ZHANG Xiang 1,GU Jian Wen 1,FU Luo An 1,SUN Qiang 2,LIU Xian Zhen 1,WANG Xuan 1 1Institute of Neurosurgery of Chinese PLA,Xijing Hospital,2Department of Biochemistry,Faculty of Preclinical Medicine,Fourth Military |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | green fluorescent protein phospholipase C retroviral vector glioma |
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