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纳米多孔PLLA膜对晚期内皮祖细胞行为的影响
引用本文:卢辉俊,冯章启,乔彤,刘晨,顾忠泽,刘长建.纳米多孔PLLA膜对晚期内皮祖细胞行为的影响[J].中国修复重建外科杂志,2009,23(2).
作者姓名:卢辉俊  冯章启  乔彤  刘晨  顾忠泽  刘长建
作者单位:卢辉俊,乔彤,刘晨,刘长建,LU Huijun,QIAO Tong,LIU Chen,LIU Changjian(南京大学医学院附属鼓楼医院血管外科,南京,210008);冯章启,顾忠泽,FENG Zhangqi,GU Zhongze(东南大学生物电子学国家重点实验室)  
基金项目:江苏省卫生厅重大科研资助项目 
摘    要:目的 观察晚期内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)在纳米多孔PLLA膜表面黏附、增殖的情况,为优化组织工程血管支架材料提供一种新途径. 方法 新西兰大白兔,体重2.5~3.0 kg,雌雄不限.取兔外周血分离和培养晚期EPCs.采用静电纺丝技术制备纳米无序纤维、有序纤维及超级有序纤维,行低温等离子体技术改性及Ⅰ型胶原表面涂覆,制备无序膜、有序膜及超级有序膜.实验分为A(单纯细胞)、B(无序膜)、C(普通膜)、D(有序膜)、E(超级有序膜)组,将原代晚期EPCs(1 × 105个/mL)复合至支架材料培养,3、5、7、9、11、13、15和17 d后MTT法检测细胞增殖能力;实验分A(无序膜)、B(普通膜)、C(有序膜)、D(超级有序膜)4组,取浓度为1× 105个/mL的第3代晚期EPCs悬液3 mL滴加至膜上,复合培养4、12和24 h后沉淀法检测细胞黏附率,1、3、7 d测定细胞增殖率,并于复合培养后4、24、72 h观察细胞形态变化. 结果 纳米PLLA纤维直径300~400 mm,孔隙率>90%.培养后3、5、7、9、11、13、15和17 d,各组A值均随培养时间延长而增高,细胞生长良好;A、B组间各时间点比较差异无统计学意义(P>0.05),培养后5~17 d,C、D、E组与A、B组间比较差异均有统计学意义(P<0.05).复合培养4h,A组黏附率高于B、C、D组,差异有统计学意义(P<0.05);12 h及24 h,B、C、D组黏附率明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.05);各组4h与12、24h比较差异均有统计学意义(P<0.05),12h与24h比较差异无统计学意义(P>0.05).复合培养1、3和7d,B、C、D组增殖率明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.05);B、C、D组间除培养后1 d,其余各时间点比较差异均有统计学意义(P<0.05).形态学观察示细胞在各支架膜上生长良好,A组及B组细胞生长较散在、杂乱;C、D组细胞沿纤维定向附着、伸展、增殖并分泌ECM,D组细胞结构保持更好. 结论 纳米多孔PLLA有序膜及超级有序膜支架能促进种子细胞在材料表面黏附、增殖,并能较好保持细胞形态,是一种理想的血管组织工程支架材料:晚期EPCs是一种理想的血管组织工程种子细胞.

关 键 词:组织工程血管  晚期内皮祖细胞  纳米多孔PLLA  支架材料

EFFECTS OF NANOPOROUS PLLA SCAFFOLD ON LATE ENDOTHELIAL PROGENITOR CELLS BEHAVIOR
LU Huijun,FENG Zhangqi,QIAO Tong,LIU Chen,GU Zhongze,LIU Changjian.EFFECTS OF NANOPOROUS PLLA SCAFFOLD ON LATE ENDOTHELIAL PROGENITOR CELLS BEHAVIOR[J].Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery,2009,23(2).
Authors:LU Huijun  FENG Zhangqi  QIAO Tong  LIU Chen  GU Zhongze  LIU Changjian
Abstract:
Keywords:
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