| 红花cDNA-AFLP反应体系的优化研究 |
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| 引用本文： | 冯娜,郭美丽,张汉明. 红花cDNA-AFLP反应体系的优化研究[J]. 医学教育探索, 2008, 0(8) |
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| 作者姓名： | 冯娜 郭美丽 张汉明 |
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| 作者单位： | 第二军医大学药学院生药学教研室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，上海市基础研究重点项目 |
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| 摘 要： | 目的为构建红花的遗传连锁图谱和功能基因的研究,探讨影响红花cDNA扩增片段长度多态性(cDNA amplified fragment length polymorphism,cDNA-AFLP)的各种因素,建立并优化红花cDNA-AFLP反应体系。方法以红花新鲜花瓣为材料,针对其内含物特殊性对Trizol法加以改进提取RNA,采用无RNase H活性的鼠源反转录酶(M-MLV RTase)结合置换合成法反转录双链cDNA;两步法酶切与连接,优化酶切时间;连接产物和预扩产物分别设置不同稀释倍数扩增并对选扩反应体系略微调整后,用6%的聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳分离,银染检测。结果改进Trizol法得到的红花总RNA样品较为完整,纯度较高,可直接用于双链的合成;经无RNase H活性反转录酶结合置换合成法得到高质量的cDNA模板。建立优化后的红花cDNA-AFLP体系为:250ng cDNA 37℃6 h经限制性内切酶MseI和EcoRI完全酶切,16℃连接12 h;连接产物最佳稀释倍数为10倍;预扩产物稀释为150倍;PAGE电泳得到清晰、稳定、分辨率较高的多态性条带。结论本研究建立的反应体系适用于红花功能基因的cDNA-AFLP研究。
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| 关 键 词： | 红花 cDNA-AFLP 优化 |
Optimization of cDNA-AFLP reaction system for Carthamus tinctorius |
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| FENG N,GUO Mei-li,ZHANG Han-ming. Optimization of cDNA-AFLP reaction system for Carthamus tinctorius[J]. Researches in Medical Education, 2008, 0(8) |
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| Authors: | FENG N GUO Mei-li ZHANG Han-ming |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Carthamus tinctorius L. cDNA-AFLP optimization |
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