| 用改良的基因免疫方法制备小鼠抗人OAT3多克隆抗体 |
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| 引用本文： | 许国双,刘安. 用改良的基因免疫方法制备小鼠抗人OAT3多克隆抗体[J]. 中国现代医学杂志, 2007, 17(15): 1826-1830 |
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| 作者姓名： | 许国双 刘安 |
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| 作者单位： | 1. 第四军医大学西京医院,肾脏病科,陕西,西安,710032
2. 西安市儿童医院,急诊科,陕西,西安,710003 |
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| 基金项目： | 笔者非常感谢美国Texas大学达拉斯西南医学中心Chambers RS博士惠赠质粒pBQAP-0VA、pCMVi-GMCSF、pCMVi-Fit3L;感谢晶美生物公司北京分公司刘雪松教授惠赠HRP标记的抗小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b和IgM抗体. |
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| 摘 要： | 目的用改良的基因免疫的方法制备小鼠抗人有机阴离子转运蛋白3(hOAT3)多克隆抗体。方法提取人肾组织总RNA,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增hOAT3基因中免疫原性较强的细胞内亲水序列片段,克隆到T-A克隆载体pCR2.1中构建pCR2.1-hOAT3载体,再从pCR2.1-hOAT3中用特异性内切酶BclI和XmaI切下hOAT3基因片段,亚克隆到载体pBQAP-TT中构建基因免疫载体pBQAP-TT-hOAT3,酶切及序列分析鉴定正确后,用基因枪与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi-Fit3L同时免疫小鼠,12周后分离血清,ELISA方法测定抗体滴度,人肾组织Western blot和免疫组化鉴定抗体的特异性和定位表达。结果成功扩增出228bp的hOAT3细胞内亲水序列片段,构建基因免疫载体pBQAP-TT-hOAT3,经酶切及序列分析鉴定正确。Western blot结果显示小鼠抗hOAT3多克隆抗体识别人肾皮质膜蛋白57kD的hOAT3。免疫组化结果显示hOAT3定位表达在人近段肾小管上皮细胞基底侧细胞膜。结论用基因免疫的方法可以成功制备高滴度和特异性抗hOAT3多克隆抗体。
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| 关 键 词： | 肾脏 有机阴离子转运蛋白3 小鼠 基因免疫 抗体制备 |
| 文章编号： | 1005-8982（2007）15-1826-05 |
| 收稿时间： | 2006-12-21 |
| 修稿时间： | 2006-12-21 |
Generation of mouse anti-human organic anion transporter 3 polyclonal antibody by improved genetic immunization |
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| XU Guo-shuang,LIU An. Generation of mouse anti-human organic anion transporter 3 polyclonal antibody by improved genetic immunization[J]. China Journal of Modern Medicine, 2007, 17(15): 1826-1830 |
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| Authors: | XU Guo-shuang LIU An |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | kidney human organic anion transporter 3 mice genetic immunization antibody generation |
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