血吸虫Sj26膜锚定表达DNA疫苗的构建、表达及其免疫原性 |
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引用本文: | 杨平,戴五星,刘朔捷,郭萍,马彦彬,唐成武,程继忠. 血吸虫Sj26膜锚定表达DNA疫苗的构建、表达及其免疫原性[J]. 华中科技大学学报(医学版), 2007, 36(2): 141-145 |
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作者姓名: | 杨平 戴五星 刘朔捷 郭萍 马彦彬 唐成武 程继忠 |
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作者单位: | 华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系,武汉,430030 |
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摘 要: | 目的构建含日本血吸虫相对分子质量为26000的抗原(Sj26GST)基因的膜锚定表达DNA疫苗,观察其免疫BALB/c小鼠后的免疫应答效应。方法用RT—PCR法,以血吸虫成虫RNA为模板,扩增获得Sj26的全长基因。利用重组PCR技术,在Sj26基因的5’端加上编码IL-2的信号肽核苷酸序列,3’端加上编码胎盘碱性磷酸酶的膜锚定序列,然后将其克隆入pIRES载体中,构建一个膜锚定型真核表达质粒pIRES-Sj26。将重组质粒转染HeLa细胞,通过RT—PCR及间接免疫荧光技术检测目的基因的表达。用构建的pIRES-Sj26疫苗肌肉注射免疫BALB/c小鼠后,以ELISA试剂盒检测小鼠血清中的总IgG抗体浓度,脾细胞培养法检测脾淋巴细胞培养上清的干扰素γ(INF-γ)含量,淋巴细胞刺激指数(SI)反映淋巴细胞增殖能力,流式细胞术检测脾细胞CD4/CD8亚群。结果经过酶切鉴定、PCR及测序证实重组质粒pIRES-Sj26构建成功,经转染HeLa细胞及免疫荧光检测证明质粒pIRES-Sj26能在体外进行表达。免疫小鼠后检测结果表明pIRES-Sj26组的血清总IgG抗体浓度、INF-γ的含量明显高于空白对照组和空载体组(均P〈0.01);其脾SI高于空白对照组和空载体组(P〈0.05);CD8^+细胞百分比高于空白对照组和空载体组(均P%0.05),CD4^+细胞百分比没有显著变化(P〉0.05)。结论成功构建日本血吸虫膜锚定表达DNA疫苗pIRES-Sj26,表达的Sj26蛋白大部分锚定在细胞膜上。pIRES—Sj26疫苗能增强BALB/c小鼠的免疫应答反应。
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关 键 词: | 抗原,血吸虫 疫苗,DNA 免疫性 |
修稿时间: | 2006-10-20 |
Construction and Expression of A Membrane-anchored DNA Vaccine Encoding Sj26GST Genes and Its Imunogenicity in Mice |
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Abstract: | |
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Keywords: | Sj26 |
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