| 摘 要： | 目的分析人乳头瘤病毒(HPV)16型E2蛋白及其转活性结构域(TAD)和DNA结合结构域(DBD)与绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白在巨噬细胞(MΦ)中的定位,并研究其对MΦ分泌TNF-α和IL-1β的影响。方法将质粒pEGFP-C1、pEGFP-C1/E2、pEGFP-C1/TAD、pEGFP-C1/DBD分别转染MΦ,倒置荧光显微镜下观察融合蛋白在MΦ中的分布与定位,通过ELISA测定转染细胞培养上清液中TNF-α和IL-1β的含量。结果 GFP、GFP-E2融合蛋白在MΦ细胞核、细胞浆内均有表达,且后者细胞核荧光亮度强于细胞浆;GFP-DBD融合蛋白表达于细胞核,GFP-TAD表达于细胞浆。GFP-E2组细胞培养上清中TNF-α和IL-1β含量分别为(321.83±22.00)pg/ml和(214.35±22.79)pg/ml,GFP-TAD组分别为(371.79±22.73)pg/ml和(233.52±17.75)pg/ml,GFP组和空白组分别为(265.74±28.74)pg/ml、167.60±18.68)pg/ml和(234.76±31.94)pg/ml、155.13±20.54l)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.05);GFP-DBD组分别为(258.24±33.55)pg/ml和(148.08±19.50)pg/ml,与GFP组和空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)。GFP-TAD组与GFP-E2组比较TNF-α含量差异有统计学意义(P<0.05),IL-1β含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论真核表达载体pEGFP-C1/HPV16E2、pEGFP-C1/TAD、pEGFP-C1/DBD均能在MΦ中表达相应的融合蛋白,GFP-E2主要定位细胞核,GFP-DBD仅定位细胞核,GFP-TAD仅定位细胞浆;HPV16E2及其TAD即时高表达上调MΦ分泌TNF-α和IL-1β。
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