| 摘 要： | 目的构建针对人脑胶质瘤细胞系的高效沉默PTTG1的RNAi载体;探讨PTTG1 siRNA干扰质粒对人脑胶质瘤细胞系U373增殖、侵袭性的影响。方法设计三对PTTG1基因干扰序列,合成能够特异干扰PTTG1的siRNA,然后将其与p Genesil2载体连接,构建pGenesil2-PTTG1 siRNA干扰载体,在脂质体作用下将PTTG1 siRNA质粒转染至胶质瘤U373细胞后,用RT-PCR和Western blot方法检测PTTG1 mRNA及蛋白表达水平的变化,通过细胞增殖实验、划痕实验和Transwell小室实验检测PTTG1对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果在胶质瘤U373细胞转染3个不同的siRNA片段干扰PTTG1的表达,RTPCR检测结果显示,PTTG1 siRNA1干扰质粒对PTTG1表达的抑制作用最明显(0.47±0.12)vs(1.00±0.15),P0.01]。转染PTTG1 siRNA质粒的胶质瘤细胞U373在48h和72h细胞增殖能力均显著低于对照组。细胞划痕实验显示干扰PTTG1可明显缩短U373细胞的迁移距离;Transwell小室结果显示干扰PTTG1后U373的穿膜细胞百分率明显下降(58.00±8.72)%vs(36.3±7.76)%,P0.05]。结论 PTTG1 siRNA干扰质粒可明显抑制胶质瘤U373细胞PTTG1的表达,并可抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭及迁移能力。
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