| 摘 要： | 目的: 探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激对新生大鼠心肌成纤维细胞（CFs）增殖的影响及其机制。方法: 采用消化法培养新生SD大鼠的CFs。实验分为4组，即5、10和20 μg/L TNF-α处理组及空白对照组。将CFs培养36 h后，用四氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞的增殖；分别用半定量RT-PCR和Western blot技术检测在5 μg/L和10 μg/L TNF-α刺激下细胞周期蛋白D1（CyclinD1 mRNA及其蛋白）表达的变化。结果: 随着TNF-α浓度的增高，MTT比色法检测的A490值呈明显递增趋势，其中5、10及 20 μg/L组的A490值，分别为0.417±0.011、0.622±0.015和0.602±0.013，与对照组（0.235±0.013）相比，有显著差异（P<0.05）。RT-PCR和免疫印迹检测表明，以5 μg/L和10 μg/L TNF-α刺激36 h后，CyclinD1 mRNA(0.706±0.113,1.698±0.135)和其蛋白(1.270±0.168,2.749±0.170)的水平均明显高于对照组CyclinD1mRNA(0.192±0.039)和蛋白（0.658±0.101）的表达水平（均P<0.01）。结论: TNF-α可通过上调CyclinD1的表达促进心肌成纤维细胞增殖，这可能为应用TNF-α信号通路抑制剂进行抗心肌纤维化治疗提供实验依据。
|
