| HOGG1基因特异性锤头状核酶表达载体的构建及其在细胞中表达的研究 |
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| 引用本文： | 张勤,张遵真.HOGG1基因特异性锤头状核酶表达载体的构建及其在细胞中表达的研究[J].现代预防医学,2005,32(3):207-209. |
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| 作者姓名： | 张勤 张遵真 |
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| 作者单位： | 四川大学华西公共卫生学院,成都,610041 |
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| 摘 要： | 目的：设计并合成人8-羟基鸟嘌呤-DNA糖苷酶(HOGG1)特异性的锤头状核酶(hammerhead ribozyme)基因并构建其真核表达载体。初步探讨其在A549细胞中的瞬时表达效应。方法：运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ)，将核酶基因克隆到真核表达载体pcDNA3．1( )中，阳性重组子由BamHⅠ和EcoRⅠ酶切，琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序证实。大量抽提阳性重组子并在非脂质体转染试剂FuGENE 6的介导下引入人肺腺癌细胞株A549，RT—PCR(逆转录多聚酶链反应)法半定量检测转染细胞中HOGG1 mRNA表达的改变。结果：经酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入pcDNA3．1( )的BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点之间，命名为pcDNA3．1( )-RZ。经RT—PCR法检测到转染核酶的靶细胞中HOGG1 mRNA表达下降36％，与空白细胞组差异有显著性。结论：成功合成HOGG1特异性的锤头状核酶基因并构建了该基因的真核表达载体。核酶在A549细胞内对靶基因HOGG1具有抑制其表达的作用。
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| 关 键 词： | HOGG1 锤头状核酶 真核表达载体 特异性 pcDNA3 酶基因 酶表达 重组子 酶切位点 DNA测序 |
| 文章编号： | 1003-8507(2005)03-0207-03 |
| 修稿时间： | 2004年11月7日 |
CONSTRUCTION AND IDENTIFICATION OF THE EUKARYOTIC EXPRESSION VECTOR CONTAINING GENES OF HAMMERHEAD RIBOZYME TARGETING HOGG1 MRNA AND ITS TRANSIENT EFFECT |
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| ZHANG Qin,ZHANG Zun-zhen.CONSTRUCTION AND IDENTIFICATION OF THE EUKARYOTIC EXPRESSION VECTOR CONTAINING GENES OF HAMMERHEAD RIBOZYME TARGETING HOGG1 MRNA AND ITS TRANSIENT EFFECT[J].Modern Preventive Medicine,2005,32(3):207-209. |
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| Authors: | ZHANG Qin ZHANG Zun-zhen |
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| Institution: | ZHANG Qin,ZHANG Zun-zhen.Department of Environmental Health,Scho ol of Public Health,Sichuan University,Chengdu,610041. |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | HOGG1 Hammerhead ribozyme Transfection |
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