| 核因子-κB p50亚基同源结构域的克隆鉴定及自主报告基因活性的检测 |
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| 引用本文： | 沈利群,梁华平,吕凤林,徐祥,李生茂,胡承香,李磊.核因子-κB p50亚基同源结构域的克隆鉴定及自主报告基因活性的检测[J].细胞与分子免疫学杂志,2004,20(4):419-421. |
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| 作者姓名： | 沈利群 梁华平 吕凤林 徐祥 李生茂 胡承香 李磊 |
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| 作者单位： | 1. 第三军医大学大坪医院野战外科研究所一室,重庆,400042;济南军区第153中心医院普通外科,河南,郑州,450042
2. 第三军医大学大坪医院野战外科研究所一室,重庆,400042 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划 (973)项目资助 (No .G1 9990 542 0 3),国家自然科学基金资助 (No .30 0 80 0 0 9),重庆市科委基金项目资助 (No .2 0 0 0 631 9) |
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| 摘 要： | 目的：获得NF-κB p50亚基同源结构域(RHD)cDNA及构建酵母双杂交系统的“饵”载体,并检测靶基因的酵母细胞毒性及自主报告基因的活性。方法：提取人外周血单个核细胞(PBMC)的总RNA,以RT—PCR扩增NF—κB p50亚基RHD基因片段,重组入酵母双杂交载体pGBKT7中。应用乙酸锂法,将重组质粒转化酵母细胞AH109,在SD／-Trp选择培养基上培养,观察转化株的生长情况;用滤膜影印法验证靶基因有无自主报告基因的活性。结果：经酶切及PCR鉴定,重组质粒中插入片段的大小与预期的结果相符。测序结果表明,其基因序列正确,无读码框移位,命名为pGBKT7-p50。转化酵母细胞后,对酵母细胞无毒性也无自主报告基因的活性：结论：pGBKT7-p50可作为酵母双杂交系统中的“饵”载体,用于后续的肽库筛选,捕捉与靶基因相互作用的多肽。
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| 关 键 词： | 核因子-κB p50 酵母双杂交系统 自主报告基因活性 |
| 文章编号： | 1007-8738(2004)04-0419-03 |
| 修稿时间： | 2003年7月19日 |
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