副溶血性弧菌所致食物中毒实时荧光定量PCR筛查方法的建立及应用

目的建立副溶血性弧菌(VP)的实时荧光定量PCR测定方法。方法利用副溶血性弧菌toxR基因DNA序列设计引物和探针,用细菌标准菌株检测方法的特异性,VP纯培养液及模拟污染食物测定方法的灵敏度和重复性,并应用在2012年-2014年疑似细菌食物中毒调查中。结果当标准曲线在2.5×101copy~2.5×106copy时,线性关系良好,相关系数为0.998 6,线性方程为y=-3.413 2x+38.919 5;仅VP标准菌出现典型的"S"形荧光扩增曲线;质粒检测灵敏度为25 copy/ml,直接能检测到的最低菌液浓度:纯培养液为21 cfu/ml,模拟食品为1.8×102cfu/ml;同一模拟食品(1.8×104cfu/ml)测定的重复性好(批内Ct值变异系数为1.12%,批间变异系数为1.70%);食物中毒RT-PCR结果为阳性的26份肛拭中16份分离到VP,1份阳性食品分离出VP,未发现假阳性。结论本法快速、敏感、特异性好,在细菌性食物中毒检测的筛查中可大大提高检测效率。