| 三叶木通MSAP反应体系的优化及引物筛选 |
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| 引用本文： | 高 寰,张 铮,周 婷,曹向然,陈阳洋,王喆之.三叶木通MSAP反应体系的优化及引物筛选[J].医学教育探索,2012,43(3):572-576. |
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| 作者姓名： | 高 寰 张 铮 周 婷 曹向然 陈阳洋 王喆之 |
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| 作者单位： | 1.陕西师范大学生命科学学院，陕西 西安 710062 2.陕西师范大学 药用资源与天然药物化学教育部重点实验室，陕西 西安 710062 3.西北濒危药材资源开发国家工程实验室，陕西 西安 710062 |
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| 基金项目： | 陕西省科技攻关项目（2010K17-05-02）；2010年国家级大学生创新性实验计划资助项目（101071825） |
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| 摘 要： | 目的 研究三叶木通表观遗传多样性，建立并优化三叶木通甲基化敏感扩增多态性（methylation sensitive amplified polymorphism，MSAP）反应体系。方法 以三叶木通叶片为材料，利用正交试验建立三叶木通MSAP的预扩增和选择性扩增的最佳反应体系。结果 建立的MSAP最佳反应体系为酶切反应：HpaII/MspI 10 U，EcoR I 10 U；预扩增反应：总体积20 μL，连接产物2 μL，E00、HM00各125 ng，dNTPs 0.312 5 mmol/L，Mg2＋ 1.875 mmol/L，Taq DNA聚合酶2 U；选择性扩增反应：总体积20 μL，稀释200倍的预扩增产物5 μL，引物E-ACT、HM-CAT各50 ng，dNTPs 0.250 mmol/L，Mg2＋ 1.250 mmol/L，Taq DNA酶1 U。利用优化的体系，最终从MSAP的80对引物中筛选出有效引物6对。结论 建立的MSAP反应体系可用于后续三叶木通DNA甲基化的相关研究。
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| 关 键 词： | 三叶木通 MSAP 遗传多样性 体系优化 引物筛选 酶切反应 |
Optimization of MSAP reaction system for Akebia trifoliata and primers screening |
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| GAO Huan,ZHANG Zheng,ZHOU Ting,CAO Xiang-ran,CHEN Yang-yang,WANG Zhe-zhi.Optimization of MSAP reaction system for Akebia trifoliata and primers screening [J].Researches in Medical Education,2012,43(3):572-576. |
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| Authors: | GAO Huan ZHANG Zheng ZHOU Ting CAO Xiang-ran CHEN Yang-yang WANG Zhe-zhi |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Akebia trifoliata (Thunb ) Koidz MSAP genctic diversity optimization of system primers screening enzyme digestion |
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