抑制TNFR/RIPK信号通路对神经细胞凋亡的影响及机制研究

【摘要】 目的 研究抑制TNFR/RIPK信号通路对急性脊髓损伤（ASCI）大鼠神经细胞凋亡的影响及作用机制。方法 160只雄性SD大鼠，随机分为空白对照组、假手术组、模型组、Nec 1组，每组又根据时间点分为12h、24h、3d、7d四个亚组。采用动脉夹钳夹法制作ASCI模型，空白对照组不做任何处理，假手术组仅暴露脊髓，不损伤脊髓，模型组和Nec 1组用动脉瘤夹脊髓全横截面1min，缝合伤口。空白对照组、假手术组和模型组注射给予生理盐水，Nec 1组注射坏死性凋亡抑制剂Necrostain 1（Nec 1）溶液1μl/kg，1次/d，分别给药12h、24h、3d、7d。给药后以BBB评分对各组大鼠后肢神经功能恢复情况进行评分，完成评分后，取10只给药7d的大鼠脊髓，进行HE染色、Nissl染色、碘化丙啶（PI）染色、Tunel染色；另取10只给药7d的大鼠，取脊髓，用Western Blot检测RIP1、RIP3、Bcl 2蛋白表达情况。结果 模型组和Nec 1组各时间点的BBB评分均显著低于空白对照组和假手术组（P＜005），Nec 1组各时间点的BBB评分显著高于模型组（P＜005）。造模7d后，模型组脊髓出现坏死、空洞现象，大量炎性细胞浸润，坏死区域面积显著高于假手术组（P＜005）；尼氏体呈细颗粒状，神经元数量减少、染色浅、排列无序，坏死性凋亡细胞较多；PI红染细胞、Tunel阳性细胞数、凋亡小体数量，以及RIPK1、RIPK3、Bcl 2蛋白表达水平显著多于假手术组（P＜005）。给予Nec 1治疗7d后，Nec 1组脊髓坏死组织较模型组少，空洞现象得到改善，炎性细胞浸润现象好转，Nec 1组坏死区域面积显著低于空白对照组和假手术组（P＜005）；尼氏体着色的神经元细胞染色较深，颗粒变粗，存活神经元数量显著高于模型组（P＜005）；PI红染细胞数、凋亡小体数，以及RIPK1、RIPK3蛋白表达水平显著少于模型组（P＜005），Bcl 2蛋白表达水平显著高于模型组（P＜005）。结论 坏死性凋亡抑制剂Nec 1能通过抑制TNFR/RIPK信号通路，下调RIPK1、RIPK3、上调Bcl 2的表达来缩小ASCI损伤面积，缓解炎症浸润，减少损伤周围神经元数量，改善神经元功能，提高损伤神经元及胶质细胞存活率，改善大鼠BBB评分，抑制坏死性凋亡。

Effect and mechanism of neural cell apoptosis through regulating TNFR/RIPK signaling pathway