Psalmotoxin⁃1抑制活化的肝星状细胞过程中microRNA差异表达谱的变化分析

目的：探讨酸敏感离子通道1a（acid?sensing ion channel 1a，ASIC1a）特异性阻断剂狼蛛毒素（psalmotoxin?1，PcTx?1）抑制血小板衍生生长因子BB（platelet derived growth factor?BB，PDGF?BB）活化的肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）过程中微小RNA（microRNA，miRNA）差异表达谱及生物信息学分析。方法：取对数生长期的HSC细胞，分为对照组、模型组和PcTx组。对照组不做处理，模型组加入PDGF?BB（10 ng/mL）培养24 h，PcTx组给予PcTx?1刺激1 h后，再加入PDGF?BB（10 ng/mL）培养24 h。采用RT?PCR和Western blot检测α?平滑肌肌动蛋白（α?smooth muscle actin，α?SMA）、Ⅰ型胶原（collagen?Ⅰ）和ASIC1a的表达，MTT法检测细胞增殖情况，验证HSC细胞是否活化以及PcTx?1是否阻断ASIC1a的表达。提取的总RNA质检合格后进行高通量测序，筛选差异表达的miRNA。通过miRanda算法对差异miRNA进行靶基因预测，并对miRNA靶基因进行功能和代谢通路分析。结果：PcTx?1阻断ASIC1a后，ASIC1a的表达降低，HSC细胞活化的标志性基因α?SMA和collagen?Ⅰ的表达明显减少，提示PcTx?1可阻断PDGF诱导的HSC活化。与对照组比较，模型组miRNA表达谱中差异表达miRNA共有38个，其中上调6个，下调32个（P < 0.05）。与模型组比较，PcTx组miRNA表达谱中差异表达miRNA共有17个，其中上调1个，下调16个（P < 0.05）。结论：高通量筛选得到的PcTx?1抑制PDGF?BB活化HSC过程中miRNA差异表达谱，为肝纤维化的发病机制研究提供了新的靶点和思路。

Changes in differential expression profiles of microRNAs during the inhibition of activated hepatic stellate cells by Psalmotoxin-1