Rho/ROCK Ⅱ特异抑制性小分子多肽对脊髓损伤微环境下新生大鼠背根节神经元轴突再生的实验研究

目的 观察Rho/ROCK Ⅱ特异抑制性小分子多肽在脊髓损伤(SCI)微环境下对新生大鼠背根节神经元(DRGNs)轴突生长的影响. 方法 取健康雌性SD成年大鼠5只,按WD法制成T9平面以下截瘫模型,术后7d取T8-10节段脊髓制作截瘫大鼠脊髓提取液.取新生SD大鼠背根神经节经酶解消化、机械吹打、离心、重悬、纯化,进行原代培养观察.DRGNs体外培养5d后随机分组加入不同物质共同培养:A组:DRGNs +60 μL PBS;B组:DRGNs+60 μL截瘫大鼠脊髓提取液；C组:DRGNs+60 μL截瘫大鼠脊髓提取液+20 μL脂质体；D组:DRGNs+ 60μL截瘫大鼠脊髓提取液+20 μL脂质体+不同量多肽(2、4、6、8、10、12 μg).不同环境下共同培养2d后行免疫荧光,测量神经轴突长度和轴突远端平均荧光密度. 结果 B、C组平均轴突长度和荧光密度均小于其他组,差异有统计学意义(P＜0.05),而B、C组间差异无统计学意义(P＞0.05).8μg多肽组平均轴突长度增长最明显,平均荧光密度最大,与其他多肽组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);2 μg多肽组与4μg多肽组的平均轴突长度和荧光密度比较差异均无统计学意义(P＞0.05)；6μg多肽组、10 μg多肽组、12μg多肽组的平均轴突长度和荧光密度比较差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 Rho/ROCKⅡ特异抑制性小分子多肽能促进SCI微环境中DRGNs轴突生长,当多肽含量为8μg时作用最明显.