| 人β干扰素基因重组腺病毒载体的构建及在骨髓间充质干细胞的表达 |
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| 引用本文： | 田道锋,陈谦学,吴立权,蔡强,陈治标,袁先厚.人β干扰素基因重组腺病毒载体的构建及在骨髓间充质干细胞的表达[J].中华实验外科杂志,2009,26(2). |
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| 作者姓名： | 田道锋 陈谦学 吴立权 蔡强 陈治标 袁先厚 |
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| 作者单位： | 1. 武汉大学人民医院神经外科,430060
2. 武汉大学中南医院神经外科 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，湖北省科技厅资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建人β干扰素(hIFN-β)基因重组腺病毒,观察重组腺病毒介导的hIFN-β转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)后,细胞内hIFN-β表达情况以及重组腺病毒对MSCs生长的影响.方法 利用细菌内同源重组技术快速构建Ad-hIFN-β腺病毒重组质粒,经酶切及测序鉴定正确后转染人胚肾细胞HEK293包装成为重组Ad-hIFN-β腺病毒,并进行滴度测定.转染的MSCs行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内hIFN-β mRNA的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测培养液上清hIFN-β的分泌情况;噻唑蓝(MTF)比色法检测细胞活力并绘制转染后MSCs生长曲线.结果 经限制性内切酶检测、基因测序及和绿色荧光观察证实成功的构建了携带hIFN-β基因的重组腺病毒,且重组腺病毒滴度高达1×109pfu/ml.Ad-hIFN-β转染MSCs后在荧光显微镜下证实有绿色荧光;RT-PCR证明转染的MSCs内有hIFN-β mRNA的表达;ELISA检测转染组1、3、5、7、10、15、20 d上清液中hIFN-β蛋白分泌量分别为192、273.436、957、605、472、279 ng/L,明显高于对照组(P<0.01);Ad-hIFN-β转染的MSCs生长曲线与正常培养MSCs差异无统计学意义(P>0.05).结论 成功构建了携带hIFN-β基因的重组腺病毒载体,重组腺病毒转染对MSCs的增殖能力无明显影响,而且Ad-hIFN-β转染大鼠MSCs能够表达并分泌hIFN-β蛋白.
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| 关 键 词： | 骨髓间充质干细胞 β干扰素 腺病毒载体 基因治疗 |
Construction of recombinant adenovirns vector containing human beta-interferon gene and its expression in bone mesenchymal stem cells |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Mesenehymal stem cells IFN-β Adenovirus vector Gene therapy |
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