RNA干扰Livin 基因表达增强骨肉瘤MG-63 耐药细胞对多柔比星的化疗敏感性

目的：研究凋亡抑制蛋白基因Livin 在逆转骨肉瘤耐药中的作用。方法：应用多柔比星逐步诱导法诱导人骨肉瘤MG-63 细胞建立耐药细胞株，MTT实验检测耐药细胞株的耐药指数，Western blotting 法检测MG-63 细胞和耐药细胞中Livin 蛋白表达的差异。构建Livin shRNA 真核表达载体，应用LipofectmineTM 2000 转染至耐药骨肉瘤细胞中，Real-time PCR 和Western blotting 分别检测Livin shRNA转染前后MG-63 耐药细胞中Livin 基因和蛋白表达的变化，流式细胞术检测细胞凋亡的变化，MTT法检测对多柔比星化疗敏感性的变化。结果：成功构建重组质粒pSilencer3.1-H1 neo-Livin si。诱导的耐药细胞MG-63/R 对多柔比星的耐药指数为81.32±5.33。Livin shRNA可抑制MG-63 细胞中Livin 基因和蛋白表达，明显低于空白对照组和非特异性转染组（分别下调72%和69%，P<0.05）。特异性转染Livin shRNA组MG-63/R 细胞的凋亡率显著高于未转染组和非特异性转染组(22.4±3.2)% vs (4.2±1.1)% 、(4.7±0.6)%，P<0.05]。3 组细胞在加入多柔比星后增殖均受到不同程度的抑制，且呈明显的时间-效应关系，但特异性转染组细胞的存活率均显著低于其他两组（P<0.05）。结论：应用RNA干扰技术下调Livin 的基因表达可有效促进耐药MG-63 骨肉瘤细胞的凋亡，从而增加其对化疗药物的敏感性。

Livin gene silence by RNA interference enhances the chemotherapeutic sensitivity of drug resistant MG-63 osteosarcoma cells to doxorubicin