青心酮对RAW264．7细胞可溶性Toll样受体4表达及炎症相关因子的影响

目的：观察活血化瘀中药秃毛冬青叶中有效成分青心酮对RAW264．7细胞炎症反应时可溶性TOU样受体4mRNA及蛋白表达、血红素氧和酶1mRNA表达、肿瘤坏死因子d分泌的影响。方法：①实验于2004-03／2005-01在华中科技大学同济医学院病理生理教研室完成。②采用RAW264．7巨噬细胞株建立细胞炎症反应模型。观察下述4种情况下培养液血红素氧和酶1mRNA的变化：脂多糖刺激；青心酮[青心酮注射液，3，4-羟基苯乙酮40mg／支（2mL），实验用，北京制药三厂]预处理3h后加脂多糖刺激；青心酮和脂多糖同时加入；脂多糖刺激3h后加入青心酮。其他指标测定实验分为3组：空白对照组（正常细胞培养，加入等数量的培养基，不加入任何药物）；青心酮预处理组（先加入溶有青心酮1&;#215;10^-7mol／L的培养基培养3h，再加入脂多糖10μg/L刺激4，8h）；未处理组（加入等数量的培养基3h，再加入脂多糖10μg/L刺激4，8h）。③采用反转录聚合酶链反应分析可溶性TOU样受体4、血红素氧和酶1mRNA的变化；Western blot方法检测可溶性Toll样受体4蛋白水平的改变，用ELISA方法检测培养液肿瘤坏死因子α分泌的变化。④组间数据处理采用配对t检验。结果：①可溶性TOU样受体4mRNA表达：青心酮预处理脂多糖刺激4h后明显高于未处理组（P〈0．01）。未处理组经脂多糖刺激4h后，明显低于空白对照组（P〈0．05）。②可溶性TOU样受体4蛋白表达：青心酮预处理组脂多糖刺激8h后明显高于未处理组（P〈0.05），但与空白对照组比较，差异不明显（P〉0．05）；未处理组脂多糖刺激8h后，明显低于空白对照组（P〈0，05）。③血红素氧和酶1mRNA表达：青心酮预处理后加脂多糖刺激和青心酮、脂多糖同时加入后明显高于脂多糖刺激后（P〈0．05）。④培养液中肿瘤坏死因子d：脂多糖刺激后明显增加（P〈0．01）；青心酮预处理脂多糖刺激后明显低于未处理组（P〈0．01）。结论：青心酮预处理能有效的抑制炎症反应，可能与其上调可溶性TOU样受体4mRNA及蛋白表达，增加血红素氧和酶1mRNA表达，减少肿瘤坏死因子α分泌有关。

Effects of dihydroxyacetone on expression of soluble Toll-like receptor 4 and inflammation factors in RAW264.7 cell line