人 MicroRNA335的预测靶基因 CCL11 CCL26及 SOX4的鉴定

目的：验证人 MicroRNA335(hsa-miR-335)与嗜酸细胞趋化因子1(CCL11)、嗜酸细胞趋化因子3(CCL26)、SOX4的靶向调控关系。方法选择网络在线的生物信息学软件 miRanda 和 TargetScan 共同预测为 hsa-miR-335靶基因的 CCL11、CCL26、SOX4作为研究对象。构建 CCL11、CCL26、SOX4基因3′端非翻译区(3′UTR)双荧光素酶报告基因载体 pMIR-RE-PORT-CCL113′UTR、pMIR-REPORT-CCL263′UTR、pMIR-REPORT-SOX43′UTR；采用 Lipofectamine 2000将真核表达质粒pMIR-REPORT-CCL113′UTR、pMIR-REPORT-CCL263′UTR、pMIR-REPORT-SOX43′UTR、阳性对照质粒分别与 Pre-miRTM miRNA335 Precursor 或阴性对照质粒共转染到293 T7/17细胞；双荧光素酶报告基因检测系统检测 CCL11、CCL26、SOX4基因3′UTR 与 Hsa-mir-335共转染萤火虫(Firefly)和海洋腔肠(Renilla)荧光素酶活性,并与阴性对照对比。结果hsa-miR-335对SOX4的荧光表达有显著的抑制作用(P <0.01),但并不影响 CCL11、CCL26荧光素酶活性(P >0.05)。结论hsa-miR-335可靶向调控 SOX4,而对 CCL11、CCL26的表达无影响。